化合物13：黃色針晶，睡菜神经EI-MS：m/z 624 +，醋酸成分分子式為C28H32O16。乙酯研究1H NMR (400 MHz,部位保护 DMSO-d6) δ: 7.87 (1H, s, H-2′), 7.53 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-6′), 6.93 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5′), 6.41 (1H, s, H-8), 6.20 (1H, s, H-6), 5.45 (1H, d, J = 7.2 Hz, Glc, H-1′′), 4.44 (1H, br s, Rha, H-1′′′), 3.27 (3H, s, -OCH3), 0.99 (3H, d, J = 6.2 Hz, Rha C-6′′′), 0.99 (3H, d, J = 6.1 Hz, Rha, H-6′′′)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 177.3 (C-4), 164.5 (C-7), 161.2 (C-5), 157.1 (C-2), 156.1 (C-9), 149.1 (C-4′), 147.5 (C-3′), 133.1 (C-3), 122.4 (C-6′), 121.2 (C-1′), 115.4 (C-5′), 113.4 (C-2′), 103.4 (C-10), 102.2 (C-1′′), 101.0 (C-1′′′), 99.6 (C-6), 94.4 (C-8), 76.7 (C-3′′), 76.1 (C-5′′), 74.5 (C-2′′), 72.1 (C-4′′′), 70.9 (C-2′′′), 70.7 (C-4′′), 70.3 (C-3′′′), 68.5 (C-5′′′), 67.2 (C-6′′), 56.0 (-OCH3), 18.0 (C-6′′′)。以上數據與文獻報道一致，化学故鑒定該化合物為槲皮素-3-O-芸香糖苷。作用

化合物14：黃色粉末，睡菜神经EI-MS：m/z 222 +，醋酸成分分子式為C13H18O3。乙酯研究1H NMR (400 MHz,部位保护 CD3OD) δ: 7.01 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7), 6.46 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-8), 5.97 (1H, m, H-4), 2.65 (1H, d, J = 17.8 Hz, H-2), 2.32 (3H, s, H-10), 1.91 (3H, d, J = 1.4 Hz, H-13), 1.07 (3H, s, H-12), 1.01 (3H, s, H-11)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 199.2 (C-9), 199.0 (C-3), 163.1 (C-5), 147.0 (C-7), 130.4 (C-8), 126.5 (C-4), 78.4 (C-6), 49.2 (C-2), 41.7 (C-1), 26.3 (C-10), 23.4 (C-12), 22.1 (C-11), 17.5 (C-13)。以上數據與文獻報道一致，化学故鑒定該化合物為去氫吐葉醇。作用

化合物15：無色油狀物，睡菜神经EI-MS：m/z 224 +，醋酸成分分子式為C13H20O3。乙酯研究1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 5.70 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-7), 5.63 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-8), 5.78 (1H, br s, H-4), 4.19 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-9), 2.35 (1H, d, J = 16.6 Hz, H-2a), 2.05 (1H, d, J = 16.6 Hz, H-2b), 1.82 (3H, d, J = 1.2 Hz, H-13), 1.11 (3H, s, H-10), 0.93 (3H, s, H-11), 0.91 (3H, s, H-12)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 197.5 (C-3), 164.5 (C-5), 135.8 (C-7), 127.9 (C-8), 125.5 (C-4), 77.9 (C-6), 65.9 (C-9), 49.4 (C-2), 41.0 (C-1), 24.1 (C-10), 23.7 (C-12), 23.1 (C-11), 19.0 (C-13)。以上數據與文獻報道一致，故鑒定該化合物為布盧門醇A。

化合物16：白色無定形粉末, EI-MS：m/z 196 +，分子式為C11H16O3。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 5.73 (1H, s, H-7), 4.18 (1H, m, H-3), 2.42 (1H, dt, J = 14.0, 2.8 Hz, H-4b), 2.01 (1H, dt, J = 14.5, 2.8 Hz, H-2b), 1.77 (3H, s, H-11), 1.75 (1H, dd, J = 14.0, 3.8 Hz, H-4a), 1.51 (1H, dd, J = 14.5, 3.8 Hz, H-2a), 1.47 (3H, s, H-9), 1.27 (3H, s, H-10)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 185.4 (C-6), 174.4 (C-8), 113.2 (C-7), 88.8 (C-5), 67.2 (C-3), 47.7 (C-2), 46.3 (C-4), 37.2 (C-1), 30.7 (C-10), 27.1 (C-11), 26.6 (C-9)。以上數據與文獻報道一致，故鑒定該化合物為黑麥草內酯。

化合物17：黃色油狀物，EI-MS：m/z 196 +，分子式為C12H20O2。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.75 (1H, dd, J = 7.1, 1.3 Hz, H-3), 5.88 (1H, dd, J = 17.2, 10.7 Hz, H-7), 5.21 (1H, dd, J = 17.2, 1.4 Hz, H-8a), 5.08 (1H, dd, J = 10.7, 1.4Hz, H-8b), 3.71 (3H, s, -OCH3), 2.19 (2H, m, H-4), 1.81 (3H, s, H-10), 1.62 (2H, m, H-5), 1.28 (3H, s, H-9)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 168.7 (C-1), 144.4 (C-7), 142.1 (C-3), 127.6 (C-2), 112.2 (C-8), 73.1 (C-6), 51.7 (-OCH3), 40.7 (C-5), 27.9 (C-9), 23.5 (C-4), 12.2 (C-10)。以上數據與文獻報道一致，故鑒定該化合物為 (E)-6-羥基-2,6-二甲基辛-2,7-二烯酸甲酯。

化合物18：白色無定形粉末，EI-MS：m/z 432 +，分子式為C19H28O11。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.15 (1H, d, J = 6.5 Hz, H-6), 7.03 (1H, d, J = 2.9 Hz, H-2), 6.95-7.02 (2H, m, H-4, 5), 4.86 (1H, d, J = 6.6 Hz, Glc, H-1′), 4.72 (1H, d, J = 1.2 Hz, Rha, H-1′′), 3.86 (3H, s, 3-OCH3), 1.21 (3H, d, J = 5.2 Hz, Rha, H-6′′)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 150.7 (C-3), 147.8 (C-1), 124.3 (C-2), 122.2 (C-5), 118.5 (C-6), 113.5 (C-4), 102.5 (C-1′), 102.2 (C-1′′), 77.9 (C-3′), 76.8 (C-5′), 75.0 (C-2′), 74.1 (C-3′′), 72.3 (C-4′′), 72.2 (C-2′′), 71.5 (C-4′), 70.1 (C-5′′), 67.9 (C-6′), 56.8 (-OCH3), 17.9 (C-6′′)。以上數據與文獻報道一致，故鑒定該化合物為3-甲氧基苯酚-1-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物19：淺黃色粉末，EI-MS：m/z 134 +，分子式為C7H6N2O。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.71 (2H, s, 2×NH), 7.04-6.97 (4H, m, H-5, 6, 7, 8)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 155.3 (C-2), 129.7 (C-4, 9), 120.4 (C-6, 7), 108.5 (C-5, 8)。以上數據與文獻報道一致，故鑒定該化合物為2-羥基苯並咪唑。

化合物20：無色針狀晶體，EI-MS：m/z 182 +，分子式為C9H10O4。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.79 (1H, s, 1-CHO), 7.13 (2H, s, H-2, 6), 3.91 (6H, s, 3, 5-OCH3)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 190.5 (C-1), 147.1 (C-3, 5), 141.0 (C-4), 128.2 (C-1), 106.8 (C-6), 56.3 (3-OCH3, 5-OCH3)。以上數據與文獻報道一致，故鑒定該化合物為syringaldehyde。

化合物21：無色粉末，EI-MS：m/z 138 +，分子式為C8H10O2。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.25～7.38 (5H, m, H-2, 3, 4, 5, 6), 4.67 (1H, dd, J = 7.4, 4.7 Hz, H-1′), 3.64 (2H, m, H-2′)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 143.4 (C-1), 129.1 (C-3, 5), 128.4 (C-4), 127.5 (C-2, 6), 76.1 (C-1′), 68.5 (C-2′)。以上數據與文獻報道一致，故鑒定該化合物為1-苯基-1,2-乙二醇。

3.2 皮質酮對PC12細胞損傷的濃度選擇

實驗結果顯示，皮質酮對PC12細胞的損傷程度隨濃度呈依賴性上升，450、550、650、750、850、950、1050、1150 μmol/L皮質酮作用PC12細胞48 h後，其細胞存活率分別為88.81±2.21%、77.07±4.21%、52.47±0.99%、44.78±0.95%、34.26±0.91%、26.96±3.36%、12.32±0.22%、13.21±2.02%。見圖1。

本結果驗證了一定濃度的皮質酮確實能損傷神經元，650 μmol/L皮質酮作用48 h對高分化PC12細胞的抑製率接近50%，故選擇以體外650 μmol/L皮質酮48 h作用於PC12細胞以模擬焦慮症神經細胞損傷狀態，構建抗焦慮活性成分體外細胞篩選模型。

3.3 單體化合物對皮質酮誘導的PC12細胞損傷的保護作用

實驗結果顯示，與650 μmol/L皮質酮組相比，化合物1、2、3、4、5、7、9、10、11、15、16、17與650 μmol/L皮質酮共同作用PC12細胞48 h後，細胞存活率分別提高至92.29±2.31%、90.74±1.61%、91.62±1.83%、63.11±2.30%、61.01±1.21%、101.18±1.56%、105.23±1.11%、67.77±1.89%、65.66±1.06%、75.94±0.24%、64.39±1.47%、72.88±1.82%。苯丙素、木脂素、黃酮、單萜類均有不同程度的促進650 μmol/L誘導的PC12細胞增殖的作用。其中，4-O-咖啡酰奎尼酸甲酯（1）、綠原酸甲酯（2）、綠原酸（3）、腫柄雪蓮苷（7）、蘇式-(7R,8R)-愈創木基丙三醇-8-香草醛醚（9）促進650 μmol/L誘導的PC12細胞保護作用最為顯著，實驗結果見圖2。

4 討論

本研究從睡菜全草醋酸乙酯部位分離並鑒定得到21個化合物，包括3個苯丙素類（1～3），2個香豆素類（4和5），6個木脂素類（6～11），2個黃酮類（12和13），4個單萜類（14～17），4個其他類（18～21）。同時考察了21個化合物對皮質酮誘導損傷的PC12細胞的保護作用。結果表明化合物1、2、3、7、9表現出顯著的保護作用，化合物4、5、10、11、15、16、17表現出中等的保護作用。

北五味子作為我國傳統的安神藥，近年來的研究報道了北五味子木脂素具有顯著的中樞抑製與安神作用。合歡皮經研究也證明其抗焦慮的主要活性成分是 (-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-葡萄糖苷，其作用機製可能與抑製PC12細胞線粒體凋亡有關。後續將進一步探索睡菜主要活性成分對皮質酮損傷的PC12細胞的抗凋亡及保護作用機製，闡明睡菜抗焦慮活性的藥效物質基礎。

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