茵陳為菊科多年生長草本植物艾屬濱蒿或茵陳蒿的幹燥地上部分.艾屬中除了茵陳蒿,還有艾草、质量青蒿及牡蒿等植物.艾屬中揮發油屬於其主要次生代謝產物,标志是茵陈预测艾屬類植物的主要藥效部位之一,用其作為Q-marker的质量預測有一定的意義.艾屬藥材中的揮發油主要以倍半萜類化合物為主,萜類化合物的标志生源途徑均為甲戊二羥酸途徑,由焦磷酸香葉酯(GPP)衍生成無環單萜或者通過異構化酶作用轉化成焦磷酸橙花酯(NPP),茵陈预测再生成各類環狀單萜.其中茵陳的质量代表成分有大牛兒烯D、α-葎草烯及石竹素等.茵陳根據其采收時節可分為綿茵陳和茵陳蒿,标志春季采收為綿茵陳,茵陈预测秋季采收為茵陳蒿.由於采收時節的质量不同,茵陳所含的标志成分出現了差異,相關標準收載綿茵陳的茵陈预测含量測定中綠原酸含量不少於0.5%,茵陳蒿的质量含量測定中濱蒿內酯不少於0.2%.通過分析艾屬的親緣關係,可將大牛兒烯D、标志α-葎草烯及石竹素作為茵陳的Q-marker.
中藥的傳統功效是在中醫理論指導下,通過長期的實踐總結而來的有效使用方法,因此基於傳統功效對茵陳的質量標誌物預測有一定的必要性.茵陳的使用曆史比較久,《神農本草經》記載將其列為上品,《傷寒論》中記載茵陳用來治療瘀熱發黃,《千金方》中其用來治療風癢疥瘡,《金匱要略》中其用來治療黃疸濕重熱少.茵陳能夠利濕退黃、清熱解毒,在治療黃疸方麵是一味非常重要的中藥材.茵陳的現代藥理作用有利膽、保肝、解熱鎮痛、抗炎、抗病毒、抗腫瘤及降血壓等作用.王守軍研究發現,萜類化合物具有抗腫瘤、鎮定、抗病毒及提高免疫力等效果.廖天錄等研究發現,香豆素具有利膽作用.牛篩龍等研究發現,總黃酮對急性肝損傷具有保護作用.茵陳萜類化合物、香豆素類和黃酮類與其有效性密切相關,作為主要藥效物質基礎,可考慮作為茵陳的潛在Q-marker.
“性味”即四氣五味,是中藥的特有屬性,反映了中藥的本質特征,是中藥藥性理論的核心.中藥臨床藥理研究表明,中藥的化學成分與其藥性具有一定的相關性.茵陳味苦、辛,性微寒,歸肝、膽、脾經.研究表明,苦、寒藥物的物質基礎以生物堿和苷類成分為主,辛味藥的化學成分多以黃酮類、萜類和揮發油為主,結合茵陳含有的化學成分種類,可將萜類化合物和黃酮類化合物作為茵陳質量標誌物的Q-marker.
陳誌娜等研究發現,用70%乙醇提取茵陳得到總黃酮(主要成分為金絲桃苷和槲皮素)與總多酚含量最高,抗氧化活性最強.張影等以綠原酸為內參物,計算茵陳標準湯劑中新綠原酸與咖啡酸等7種成分的相對校正因子,從而計算出7種成分的含量,並與常規外標法實測含量值沒有顯著差異,一測多評法可作為茵陳標準湯劑多指標成分定量分析的首選方法.熊耀坤等利用GC-MS法對茵陳提取的揮發油成分進行鑒定分析,得出茵陳鮮品的揮發油含量高於茵陳幹品,應注意茵陳產地加工幹燥過程的質量控製和藥材保障.張慧等利用分光光度法,以獐牙菜苦苷為對照品,經HCl水解,2,4-二硝基苯肼乙醇試液和Na OH 60%乙醇溶液顯色後,於444 nm波長處測定藏茵陳總環烯醚萜苷含量,該方法準確、簡單、穩定性好,可用作測量總環烯醚萜苷含量的首選方法.吳小可等采用HPLC法,以甲醇和0.2%的甲酸(48∶52)為流動相測定菊科植物中總黃酮醇苷含量,結果表明,槲皮素、異鼠李素2種黃酮類化合物分別在1.06~212μg/m L、0.93~186μg/m L濃度範圍內線性關係均良好,該方法可作為茵陳槲皮素和異鼠李素含量測定的一種方法.茵陳色原酮對急性乙醇性肝損傷具有保護作用,可在體內與人血清白蛋白結合而發揮穩定的生物活性作用,可抑製β-葡萄糖醛酸酶的活性,使葡萄糖醛酸不被分解,從而加強肝髒解毒作用.麥爾旦·吐爾遜麥麥提等利用薄層層析、矽膠反複柱層析、波譜分析技術和理化常數對照的方法,從80%乙醇提取物中分離並鑒定出了茵陳色原酮,且對其碳譜數據進行了歸屬.張啟偉等利用UV、MS與HNMR確定茵陳中3'-甲氧基薊黃素的結構,采用HPLC分離與麵積歸一化法計算3'-甲氧基薊黃素含量,可用作3'-甲氧基薊黃素定量分析的方法.馮藝飛利用大孔吸附樹脂對茵陳總黃酮進行分離純化,通過顯色反應、紅外光譜、液質聯用、FT-IR譜圖及LC-MS分析等方法,確定出茵陳提取物中含有黃酮類化合物,並推斷鑒定出含蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷和香葉木苷幾種成分.廖彥等利用HPLC指紋圖譜、RRLC-MS/MS及HPLC-DAD方法確定了茵陳的8個共有峰並對8個共有峰的化學成分進行了指認.李楊楊等利用HPLC方法,將濃度設置在3.9~500μmol/L內可以使得6,7-二甲氧基香豆素的峰麵積之間的線性關係良好.以上多種成分可為茵陳Q-marker的預測提供一定的參考.
茵陳作為我國的傳統中藥,其資源豐富,藥用曆史悠久,且臨床療效突出.相關研究表明,茵陳具有利膽、保肝、降血壓、抗腫瘤、抗病毒、解熱鎮痛以及提高免疫功能等作用.茵陳中的化學成分複雜,容易受采收時節的影響.現行標準將茵陳中的綠原酸作為其指標,但綠原酸屬於苯丙素類化合物,在其他植物中也存在,如金銀花等.因此,建立科學、合理的質量評價方法,對茵陳的質量進行全麵準確地評價並指導茵陳資源的合理開發利用以及對茵陳產業的健康發展具有重要的現實意義.
本研究依據Q-marker理念,基於網絡藥理學從成分有效性的角度對茵陳進行研究,發現茵陳成分中13個活性成分可通過AKT1、TNF、JUN、MAPK1、RELA、TP53及IL6等靶點作用於癌症、乙型肝炎及TNF等關鍵信號通路發揮藥理作用.並對茵陳的生源途徑和成分特異性、傳統功效、傳統藥性以及化學成分可測性進行了預測.利用網絡藥理學方法來篩選出數據庫中的有效成分並與其他預測方法的結果進行比較,可以豐富篩選成分,有利於更好地確定Q-marker.結果表明,茵陳的黃酮類成分主要有槲皮素與異鼠李素,揮發油的主要成分為大牛兒烯D,甾醇類主要化合物為β-穀甾醇,香豆素類的主要化合物為6,7-二甲氧基香豆素與馬栗樹皮素二甲醚,色原酮類化合物主要為茵陳色原酮.研究表明,槲皮素、異鼠李素和β-穀甾醇廣泛存在於大多數的藥用植物中,不符合成分特有性的特點,不適合作為茵陳的Q-marker.而茵陳蒿靈A屬於茵陳特有成分,馬栗樹皮素二甲醚存在於茵陳花序和花蕾部分,且在花蕾中含量最高,在開花季節其含量可達1.98%,隨即迅速降低,具有可檢測特點,而大牛兒烯D是茵陳揮發油的主要活性部位,6,7-二甲氧基香豆素和茵陳色原酮具有利膽,促進膽汁分泌的作用,體現了茵陳的主要藥效作用,以上幾種成分可以為茵陳Q-marker的控製和篩選提供科學的理論依據,以便於建立合理的茵陳質量控製及溯源體係.
Q-marker的預測途徑在劉昌孝院士最初提出的傳遞與溯源、有效、特有、可測及處方配伍的“五原則”基礎上,又衍生出了藥動學與體內過程相關性,不同產地化學成分特有性,可入血化學成分以及不同加工方法等途徑.Q-marker的預測途徑的增多,篩選出來的成分也越來越多,使得Q-marker的預測也產生了一定的問題.如,根據不同預測途徑篩選出一定的Q-marker,應該通過怎樣的方式對篩選出來的Q-marker進行取舍;根據植物的親緣性進行Q-marker的預測,遇到不同科,不同屬的植物含有相同的成分,那麽該成分屬於哪一種植物的Q-marker;Q-marker的預測是根據什麽標準來確定其可以作為質量標誌物;Q-marker的預測主要是通過查閱文獻進行內容整合,但是忽略了中藥成分的未知性的特點,那麽現已預測的Q-marker是否準確等等.網絡藥理學主要是利用現有的中藥數據庫完成高通量的計算機虛擬篩選,將已有的數據進行分析和整合來獲取相關的成分、靶標與通路.中藥材具有多成分與多靶點的特點,不同藥材中含有相同成分,利用網絡藥理學方法來篩選出數據庫中的有效成分與其他預測方法的結果進行比較,可以豐富篩選成分的多樣性,有利於更好地找出Q-marker.但網絡藥理學篩選的是藥材中含有的成分,並沒有將單味藥材中特有成分或加工過程中形成的可以定性定量的特有化合物區分出來.文獻分析是有目的性地去篩選單味藥材,將藥材各個方麵的研究結果歸納總結起來,如將炮製工藝、采收時節與藥材配伍等因素考慮在內得出的具有專屬性、有效性和安全性的化學成分.因此會出現網絡藥理學研究結果和文獻分析結果矛盾的情況.因此,Q-marker的建立應該建立在“位”“量”“性”“效”的基礎上,利用網絡藥理學與文獻分析等方法來實現Q-marker的定位,利用代謝組學與含量測定等方法來實現量的確定,利用指紋圖譜與判別分析來實現定性鑒別,最後利用體內體外藥理實驗來實現效的驗證.隻有將“位”“量”“性”“效”結合起來,綜合分析得出的結論才具有可信度,才可以為質量標準的建立提供依據.
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