結晶紫，超高以N，效液相色析N-二甲基苯胺為原料，谱串谱法品中經過加工得到成品，联质留干是检测结晶一種三苯基甲烷染料。結晶紫用途廣泛，水产素分多用於消毒、紫残殺菌、扰因生物染色劑、超高獸藥、效液相色析飼料等。谱串谱法品中結晶紫以其殺菌效果好，联质留干保鮮效果佳的检测结晶特點，多年來廣泛用於水產養殖業和水產品長途運輸。水产素分然而，紫残研究發現結晶紫易被生物組織吸收，在生物體內代謝後生成具有致癌、致畸、高毒、高殘留特性的隱性結晶紫。目前很多國家地區都將結晶紫列為水產養殖的禁用藥物，我國目前也將結晶紫列為可食用動物禁用獸藥。

近年來，可食用動物中違規使用結晶紫等藥品的情況備受關注。歐盟要求水產品中結晶紫不得檢出。2005年，我國發布實施的GB/T19857-2005《水產品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定》規定結晶紫的檢測限為2.0μg/kg。

然而，檢測過程中時常遇到試劑空白檢出結晶紫，以及分析結果穩定性差的現象。國內有學者對結晶紫檢測做了相關研究。吳淑秀等應用高效液相色譜串聯質譜法測定了實驗室檢測過程中常用的筆、紙、標簽、樣品袋等用品中結晶紫的含量。結果表明，大部分供試物品均含有一定量的結晶紫，其中A4打印紙、標簽紙和圓珠筆中含量很高。高華鵬等采用超高效液相串聯質譜法測定了結晶紫和隱性結晶紫的含量，結果顯示出實驗室用品均能檢出結晶紫。許榮富等用反相柱成功地分離出了結晶紫、甲基紫、堿性品藍、堿性豔藍B、銅酞菁和羅丹明B等幾種有色染料成分，檢測出圓珠筆的結晶紫含量。

本文針對水產品檢測過程中結晶紫檢測幹擾因素進行分析，在不同的時間條件下，對試驗可能接觸的辦公用品如紙、筆、標簽紙，以及包裝材料如留樣用塑料袋中的結晶紫含量進行檢測，從而得出隨時間變化的幹擾因素對檢測結果的影響。

1材料與方法

1.1試劑與儀器

A4打印紙、送樣樣品標簽紙、激光打印標簽紙、黑色簽字筆、黑色馬克筆、藍色圓珠筆：得力集團有限公司；實驗室濾紙：塘玻（天津）實驗儀器銷售有限公司；留樣用塑料袋：河源市華豐塑膠有限公司。乙腈（色譜純）：德國默克公司；乙酸銨（優級純）：天津科密歐化學試劑公司；結晶紫、隱性結晶紫：德國Dr.Ehrensorfer公司。1290/6460超高效液質聯用儀、EclipsePlus色譜柱C18（5μm×100mm×2.1mm）：德國Agilent公司；AL204-IC電子天平：上海梅特勒-托利多儀器；WAT200609固相萃取裝置：沃特世Waters公司；HS501振蕩器：IKA公司；1mL/cc一次性使用無菌注射器：浙江華福醫用器材有限公司；尼龍膜過濾器（0.22μm，13mm）：博納艾傑爾科技有限公司；1mL進樣瓶：浙江愛吉仁科技有限公司；2mL塑料滴管：上海晶安生物信息有限公司。

1.2試驗方法

1.2.1標準溶液的配製

0.1μg/mL的結晶紫工作液的配製：精確移取0.01mL0.1mg/mL的結晶紫中間液，置於10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度線於4℃以下避光儲存搖勻備用。

1.2.2樣品前處理

將待測的A4紙、實驗室濾紙、送樣樣品標簽紙、激光打印標簽紙和留樣用塑料袋分別裁剪成2cm×2cm同樣大小的紙片，如圖1所示。把待測所用黑色簽字筆、黑色馬克筆、藍色圓珠筆分別在2cm×2cm的空白實驗室濾紙上用力均勻地分別書寫一條、兩條、四條長度為兩厘米的印記並晾幹，如圖2所示。加入2mL乙腈浸提5min，渦旋振蕩5min。浸提液經0.22μm濾膜過濾。

1.2.3不同提取時間對汙染物含量影響

將裁剪好的相同濾紙中畫相同兩條黑色簽字筆印記的紙、畫有相同黑色馬克筆印記的濾紙、畫有相同藍色圓珠筆印記的濾紙、相同送樣樣品標簽紙、相同激光打印標簽紙、相同留樣用塑料袋分別放入50mL離心管中，加入2mL乙腈分別浸提5、10、30、60、120、240、360min和720min，浸提液經0.22μm濾膜過濾後用高效液相色譜-質譜聯用儀檢測汙染物（顯性結晶紫和隱性結晶紫）含量。重複5次作為平行試驗，從而減小誤差。

1.2.4儀器條件

1.2.4.1液相色譜條件

色譜柱：EclipsePlusC18，1.8μm×100mm×2.1mm（內徑）；流動相：A為500mL乙腈+500μL甲酸+0.385g乙酸銨，B為乙腈；流速：300μL/min；柱溫：30℃；進樣量：10μL。流動相梯度洗脫條件見表1。

1.2.4.2質譜條件

離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測（multiplereactionmonitoring，MRM）；電噴霧電壓：4000V；殼氣溫度：350℃；離子源溫度：300℃。

顯性結晶紫和隱性結晶紫檢測的質譜條件見表2。

1.2.5標準曲線的繪製

準確分別吸取結晶紫的標準工作液0、1、5、10、20、50、100μL至進樣瓶內，依次分別加入乙腈1000、999、995、990、980、950、900μL至每個進樣瓶內，配製成濃度為0、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/L的結晶紫標準液。將不同濃度的標準液置於超高效液相色譜串聯質譜儀，在最佳色譜條件下進行色譜分析，以保留時間定性，測定峰麵積定量。以結晶紫及其代謝物濃度為橫坐標，以結晶紫及其代謝物的液相峰麵積為縱坐標繪製標準曲線，計算回歸方程及其相關係數。

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