4、真菌分析步驟
(1)試樣的毒素的检製備
①穀物：在粉碎機中粉碎並通過廬2mm圓孔篩。
②啤酒：使用前先置於0～4℃冰箱冷藏1h，真菌啟蓋，毒素的检倒入錐形瓶中在振蕩器上振搖消泡。真菌
(2)免疫親和柱色譜淨化高效液相色譜法(快速確證方法)
①提取
a．穀物(小麥、毒素的检大麥、真菌玉米)：準確稱取試樣50.0g(準確到0.1g)於均質器配置的毒素的检攪拌杯中，加入5.0g氯化鈉，真菌加入100mL甲醇+水(8+2)(V1)。毒素的检將攪拌杯置於均質器上，真菌於20000r／min高速攪拌提取1min。毒素的检提取液經槽紋折疊濾紙過濾於幹淨的真菌燒杯中。準確移取10.0mL(V2)濾液並加入40.0mL水(V2)稀釋，毒素的检混合均勻，真菌經玻璃纖維濾紙直接過濾入10mL注射器。
b．酒類(啤酒、葡萄酒、黃酒)：準確移取試樣10mL於100mL燒杯中，加入10mLl％聚乙二醇+5％碳酸氫鈉溶液(V1總量應為20mL)，用玻璃棒攪拌均勻。準確移取10.0mL(V2)經玻璃纖維濾紙直接過濾入10mL注射器。
②淨化
a．穀物：將免疫親和柱連接於10mL玻璃注射器下。準確移取10.OmL(V4)樣品提取液於玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器相連接，調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2～3mL空氣通過免疫親和柱。以10mL淋洗溶液、10mL水先後淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，並使2～3mL空氣通過免疫親和柱。準確加入1.OmL(V)甲醇洗脫，流速為1～2mL/min。收集全部洗脫液於玻璃試管中。
b．酒類：將免疫親和柱連接於10mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL(V4)樣品提取液於玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器相連接，調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2～3mL空氣通過免疫親和柱。以5mL淋洗溶液、5mL水先後淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，並使2～3mL空氣通過免疫親和柱。準確加入1.0mL(V)甲醇洗脫，流速為1～2mL/min。收集全部洗脫液於玻璃試管中，供檢測用。
③測定
a．高效液相色譜條件激發波長360nm；發射波長420nm。
色譜柱：C18柱(柱長150mm，內徑3.0mm，填料直徑5μm)。
流動相：乙腈-0.012mol/L磷酸鈉溶液。進樣量：20μL。
b．操作：用微量注射器吸取20μL赭曲黴毒素A標準工作溶液注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下測定標準溶液的響應值(峰高或峰麵積)，得到赭曲黴毒素A標準溶液高效液相色譜圖。
用微量注射器吸取20μL樣品洗脫液注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下測定試樣的響應值(峰高或峰麵積)。經過與赭曲黴毒素A標準溶液譜圖比較響應值得到試樣中赭曲黴毒素A的濃度(c)。
④空白試驗用水代替試樣，按上述步驟做空白試驗。
⑤結果計算：樣品中赭曲黴毒素A的含量(X)以μg/kg表示，按式1計算：
其中：
式中：X1——樣品中赭曲黴毒素A的含量，μg/kg；
c1——試樣中赭曲黴毒素A的含量，μg/L；
co——空白試驗中赭曲黴毒素A的含量，μg/L；
V——最終甲醇洗脫液體積，mL；
W——最終淨化洗脫液所含的試樣質量，g；
m——試樣稱取的質量的數值，g；
V1——樣品和提取液總體積，mL；
V2——稀釋用樣品濾液體積，mL；
V3——稀釋液體積，mL；
V4——通過免疫親和柱的樣品提取液體積，mL。
⑥測定低限：免疫親和柱色譜淨化高效液相色譜法測定穀物、酒類、藤蔓水果幹、香辛料的低限均為1μg／kg(μg/L)。
(3)免疫親和柱色譜淨化熒光光度法(快速篩選方法)
①提取
a．穀物(小麥、大麥、玉米)同(2)①a。
b．酒類(啤酒、白葡萄酒、黃酒)：準確移取試樣50mL於均質器配置的攪拌杯中，加入50mL 1％碳酸氫鈉溶液(V1總量應為100mL)，以20000r/min高速攪拌提取1min，靜置。準確移取10.0mL(V2)並加入40.0mL純水(V3)稀釋，用玻璃纖維濾紙直接過濾入10mL注射器。
②淨化
色穀物同(2)②a操作至“以10mL淋洗溶液、10mL水先後淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，並使2～3mL空氣通過免疫親和柱”為止。準確加入1.5mL(V)洗脫溶液洗脫，流速為1～2mL／min。收集全部洗脫液於玻璃試管中，供檢測用。
b．酒類(啤酒、白葡萄酒、黃酒)：將免疫親和柱連接於10mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL( V4)樣品提取液於玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器相連接，調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2～3mL空氣通過免疫親和柱。以10mL淋洗溶液、10mL水先後淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，並使2～3mL空氣通過免疫親和柱。準確加入1.5mL(V)洗脫溶液洗脫，流速為1～2mL/min。收集全部洗脫液於玻璃試管中，供檢測用。
③測定：熒光光度計儀器條件激發波長360nm，發射波長440nm。
熒光光度計校準以0.05moL/L硫酸溶液為空白，調節熒光光度計的讀數值為0；以熒光光度計校準溶液調節熒光光度計的讀數值為36。
樣液測定將洗脫液立即置於熒光光度計中讀取樣液中赭曲黴毒素A的濃度(c)。
④空白試驗用水代替試樣，按上述步驟做空白試驗。
⑤結果計算：
⑥測定低限：免疫親和柱色譜淨化高效液相色譜法測定穀物、酒類、藤蔓水果幹、香辛料的低限均為1μg／kg(μg/L)。
5、結果
(1)色譜圖：圖為赭曲黴毒素A標準溶液的高效液相色譜圖。
（2）濃度與響應值的線性關係 赭曲黴毒素A係列標準溶液的液相色譜濃度與響應值的線性關係
線性方程：y=3.185021x-0.075619(R=0.9999)
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