點擊觀看課程視頻
免疫檢測法(immunoassay,原创IA)是抗生一種利用抗原-抗體特異性反應檢測各種物質( 藥物、激素、素残蛋白質、检测检测微生物等)的法法方法。IA 是免疫近幾十年發展起來的技術,主要包括放射免疫法、原创酶聯免疫吸附法、抗生熒光免疫測定法、素残固相免疫傳感器、检测检测膠體金免疫層析技術、法法蛋白芯片等。免疫目前研究應用較多的原创是酶聯免疫吸附法(ELISA)和膠體金快速檢測試紙條,該法比放射免疫法安全、抗生方便,素残固相免疫傳感器剛剛起步,有少量的文獻報道。
一、酶聯免疫吸附技術(ELISA):使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表麵的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與其他物質分開,最後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物後,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據顏色反應的深淺進行定性或定量分析。ELISA檢測方法特異性強,靈敏度高,對試劑的選擇性高,很難同時分析多種成分,對結構類似的化合物有一定的交叉反應。
二、蛋白芯片法:又稱蛋白質微陣列( protein microarray),是在基因芯片之後發展起來的。其原理是指采用原位合成或微量點樣等方法,將多種不同的蛋白分子有序地固化於支持物(如玻片、膜、孔板等載體)的表麵,組成密集二維分子陣列,然後與待測生物樣品中的靶分子結合,通過特定的儀器,比如平板掃描儀、激光共聚焦掃描儀等對芯片信號的強度進行快速、並行、高效地檢測分析,從而判斷樣品中靶分子的數量或含量。目前蛋白芯片常用的檢測方法為標記檢測法,通常使用納米材料,熒光、酶等物質標記,通過相應的儀器( 平板掃描儀或激光共聚焦芯片掃描儀等)對信號進行檢測,從而獲得檢測結果。熒光標記檢測法因其靈敏度高,已成為目前使用最多的一種標記方法。但需注意的是熒光素的易淬滅和易漂白性。商品化的熒光檢測設備己經相當成熟,所以市場上開發的蛋白質芯片產品大部分以熒光為標記物。
蛋白芯片法與傳統ELISA方法比較,具有高通量,樣品用量少,一份樣品可同時進行多指標分析,大大降低了檢測成本,提高了檢測效率,並且檢測限與靈敏度等均與ELISA方法相當。因此蛋白芯片法逐漸成為免疫分析方法的發展方向之一,受到越來越廣泛的重視。