2、高效液液分配備譜法:液液分配色譜法是液相流動相和固定相都是液體的液相色譜法。利用樣品組分在互不相溶的色谱兩種液相中分配係數的不同得以實現分離和分析。流動相和固定相為兩種互不相溶的高效液體,二者之間有一個明顯的液相分界麵,流動相流過色譜柱時,色谱很大麵積上與固定相接觸,高效流動相中的液相樣品組分在兩相之間很快進行平衡分配,由於它們在兩相之問相對溶解度的色谱差異,會以不同速度流經色譜柱,高效從而得到分離。液相
液液分配色譜法的色谱特點:可使用多種溶劑,固定液抗衝刷能力強,高效不需要預飽和,液相再現性能非常穩定;分離適用性廣,色谱從非極性化合物到極性化合物,都可以作其分離對象;為改善分離度可以進行梯度洗脫,能做高精度定量分析。基於這些特點,液液分配色譜法廣泛地用於各種樣品中農藥殘留的分析測定。
3、離子交換色譜法:離子交換色譜法是根據離子交換能力大小的原理進行分離的液相色譜法。離子交換色譜法通常使用的是低交換容量的離子交換劑,這種交換劑的表麵有離子交換基團。帶負電荷的交換基團(如磺酸基和羧酸基)可用於陽離子的分離,帶正電荷的交換基團(如季銨鹽)可用於陰離子的分離。以陰離子交換為例,在庫侖力的作用下,樣品陰離子以及淋洗液中的陰離子(也稱為淋洗離子)都與固定相中帶正電荷的交換基團相互作用。樣品陰離子不斷地進入固定相,又不斷地被淋洗離子交換而進入流動相,在兩相中達到動態平衡,不同的樣品陰離子與交換基的作用力大小不同,電荷密度大的離子與交換基的作用力大,在樹脂中的保留時問就長,於是不同的離子相互分離。
離子交換色譜法固定相,主要有以下類型:微粒樹脂型、表麵多孔壁、矽膠鍵合相多孔微粒。矽膠骨架上引入各種離子基團,或塗漬鍵合有機離子交換劑。流動相多采用在水溶液中含有一定離子強度的緩衝液,或與水混溶的有機溶劑,如甲醇、乙醇、乙腈、二氧六環等。
離子交換色譜法特點:以水(加入相應的電解質)作為淋洗液。現廣泛地應用於無機離子的分離。在水溶液中解離度較高的少數農藥品種,可采用電導檢測器測定。
4、空間排阻色譜法空間排阻色譜法是依據分子大小、形狀而分離的液相色譜法。用化學惰性的具有網狀結構的多孔性物質凝膠作固定相,試樣組分按分子大小進行分離,其作用近似於分子篩效應。試樣進入色譜柱後,隨流動相在凝膠外部間隙及凝膠孔穴旁流過,體積大的分子不能滲透到凝膠縫隙裏去,而較早地被淋洗出來;中等體積分子產生部分滲透作用;小分子可以滲透到孔穴裏去,因此較晚被衝洗出來,從而達到分離的目的。水或水溶液作流動相的凝膠色譜稱為凝膠過濾色譜,有機溶劑作流動相的凝膠色譜稱為凝膠滲透色譜。
凝膠色譜固定相有3種類型:軟性凝膠(如網狀交聯多聚葡萄糖等)、半剛性凝膠(如交聯聚苯乙烯等)、剛性凝膠(如多孑L矽膠等)。流動相為水、緩衝鹽溶液、乙醇、四氫呋喃、甲苯、間甲苯酚、N,N一二甲基甲酰胺等。
空間排阻色譜法特點:非離子型的高分子化合物,樣品分子質量差別愈大愈易分離;司測聚合物的分子質量分布;是一種最穩定的分離手段,不會引起樣品變質和損失。
(三)高效液相色譜法的基本組成
高效液相色譜儀由輸液係統、進樣係統、分離係統、檢測係統、計算機控製和數據處理係統(含工作站軟件)組成。
1、輸液係統
輸液係統一般由儲液器及脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置構成,其功能是給分離係統提供穩定的能將}昆合組分分離的高壓液體。
(1)儲液器:儲液器一般是玻璃或聚四氟乙烯襯裏的塑料容器,容積0.5~2L。有時也用500mL溶劑瓶。流動相中會溶解空氣(水更明顯),含有微粒雜質,因此流動相在轉入儲液器前必須過濾和脫氣。製備好的流動相一般是先過濾後脫氣。對於擁有在線脫氣裝置的儀器隻需要過濾就可以正常工作。過濾器采用全玻璃係統,依據色譜柱內徑和填料顆粒細度選用0.22μm或0.45μm水係或有機係的微孔濾膜進行過濾。置於儲液器底部的輸液導管,需要安裝孔徑lOμm的不鏽鋼質或鋁質或聚四氟乙烯材料的過濾頭,該過濾頭要定期(不宜超過7d)清洗,特別是在水相中的,使之保持通暢,避免輸液管路內產生氣泡。流動相脫氣是非常重要的,若氣泡吸人高壓泵液缸,會導致壓力不穩或停止輸液。
(2)脫氣裝置:在高效液相色譜儀工作期間,每天或每時每刻都要對流動相進行脫氣。脫氣有3種處理方式。
①超聲波振蕩脫氣加真空脫氣法(5min+5min):將儲液器置於清洗用超聲波振蕩5min,然後再用微型真空泵或循環水式真空泵進行脫氣5min。有文獻報道,將上述兩種方法聯合使用脫氣效果最佳。在充裝流動相的密閉容器中,抽真空使溶解氣體從流動相中逸出的方法不適合按比例混合好的流動相脫氣,因為長時間的抽真空會改變流動相的配比,可能會使組分的保留時間發生明顯的變化。另外,使用該方法脫氣的流動相隻能滿足高壓梯度洗脫。
聲明:本文所用圖片、文字來源《農藥殘留分析》,版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題,請與本網聯係
相關鏈接:色譜柱、微粒、緩衝鹽溶液、溶劑瓶