黃曲黴毒素(aflatoxin,汉中AF)是市市售植由黃曲黴(Aspergilusflavu)和寄生曲黴(Aspergillusparasiticus)經聚酮途徑所產生一組有毒次生代謝產物,其結構含有一個二呋喃環與一個氧雜萘鄰酮。物油污染目前已知的中黄状况黃曲黴毒素有20多種,已分離鑒定出的曲霉有黃曲黴毒素有 B 1、B 2、毒素调查G 1、汉中G 2 等18種,市市售植其中AFB1毒性和致癌性最強。物油污染自然環境下,中黄状况農作物如水稻、曲霉油菜籽、毒素调查花生等,汉中在種植後生長、市市售植收獲的物油污染過程中,很容易被產毒真菌汙染,被汙染的穀物,在儲藏、加工、運輸等過程通過食物鏈各個環節傳遞最終危害人類健康。聯合國糧食與農業組織(FAO)統計,每年全球糧食將近有四分之一受到真菌毒素汙染,造成了數以億計的經濟損失。AF的產毒需要適宜的溫濕度和經濟發展情況有關,熱帶和亞熱帶地區降水多、溫度高的地區食品受黃曲黴毒素的汙染情況較嚴重,歐美經濟發達地區的汙染狀況遠低於東南亞等經曆落後地區。
經過大量文獻查閱,胡佳薇等人評價過2012-2015陝西市售食品中AF的汙染情況,對於陝南地區總體的市售食品進行了調查,未見關於漢中地區植物油中黃曲黴毒素的係統汙染調查分析,也為見關於該地區植物油中毒素超標的相關報告和處罰。漢中地處陝西南部,全年氣候濕潤,降水豐沛,陝西最大的優質油菜籽種植基地,有“陝西魚米之鄉”的美稱,菜籽油是當地居民膳食結構中的主要品種。隨著社會經濟的發展,商品流通加速,漢中市場上除了本地產菜籽油外,還有來自其他地區的大豆油、花生油、調和油、香油等。本研究結合漢中當地的種植條件和飲食習慣,從8個行政區縣中采集了160份植物油,進行4種AF的聯合汙染狀況的調查,評估該地區植物油中AF汙染狀況,係統掌握該地區AF的汙染情況,為食品安全控製和當地居民的AF膳食暴露評估提供依據。
2019年1月至2020年12月,陸續對漢中市的8個行政區縣的超市商場、糧油店、生產企業、餐飲店按照行政區域為分成特征進行隨機采集(見圖1、圖2)。累計共采集到食用植物油160份(其中菜籽油120份,花生油、大豆油、調和香油等40份)。逐批采樣後封存,幹燥陰涼處保存,備檢。
水浴恒溫振蕩器(常州億能實驗儀器廠),分析天平(日本島津 d=0.01 g);氮吹儀(睿科科技有限公司);高效液相色譜儀(日本島津LC-20AD,熒光檢測器);光化學衍生器、C18色譜柱(月旭科技有限公司);黃曲黴毒素免疫親和柱3mL(Rome labs);MIlli-Q純水機(美國密理博公司)。
甲醇(色譜純,賽默飛);吐溫-20(分析純,科密歐)氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀(分析純,科龍),黃曲黴毒素標準溶:AFG2 0.537 μg/mL,AFG1 0.539 μg/mL , AFB2 2.08 μg/mL,AFB1 2.07 μg/ mL(青島普瑞邦 STD#1081)。
按照國標GB5009.22-2016《食品安全國家標準食品中黃曲黴毒素B族和G族的測定》第三法高效液相色譜-柱後衍生法進行試驗。
樣品提取:稱取5.0 g(精確至0.01g)粉碎混合均勻樣品於離心管中,加入甲醇水溶液(80+20)20 mL渦旋混合,搖床中震蕩1 h,玻璃濾紙過濾,濾液備用。
樣品淨化:將免疫親和柱取出恢複至室溫,準確吸取2 mL濾液,加入25 mL的PBS溶液於25 mL注射器中,以2 mL/min速度勻速下滴,樣液滴完後,用10 mL的水淋洗親和柱2次,最後用2 mL甲醇洗脫親和柱,收集洗脫液,氮氣吹幹用流動相定容至1mL,渦旋,過濾膜,裝瓶上機檢測。該法的檢出限為AFG2 0.01 μg/mL,AFG1 0.03 μg/mL,AFB2 0.01 μg/mL,AFB1 0.03 μg/ mL。
流動相:甲醇-乙腈-水(47:3:50,V/V);進樣量:20 μL;檢測波長:激發波長:360 nm,發射波長440 nm;流速:0.8 mL /min;柱溫:35℃;色譜柱:月旭C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)。
全球有 100 多個國家和地區製訂了食品和飼料中 AFT限量標準。我國在GB2761-2017僅對食品中AFB1采取了嚴格的限量標準,植物油(不包括玉米油、花生油)均要求≤10 μg/kg,玉米油、花生油要求≤20 μg/kg,暫時沒有關於AF總量的限量要求。
用AF混標配製標準曲線,具體梯度為(ng/mL):AFB1:1.04、2.08、3.12、4.16、5.20、10.4;AFB2:1.03、2.07、3.10、4.14、5.18、10.3;AFG1:0.27、0.54、0,81、1.08、1.35、2.70;AFG2:0.27、0.53、0,80、1.06、1.33、2.66,通過光化學衍生器柱後衍生,帶熒光檢測器的高效液相色譜分離測定,得出各組分不同濃度下的峰麵積,以峰麵積對標品的濃度進行線性回歸分析,結果見表1。
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