2 方法與結果

2.1 18批黃連湯物質基準對應實物的经典基准製備

對黃連湯煎煮工藝進行研究，確定最佳工藝為：稱取黃連41.40 g，名方甘草（水炙）41.40 g，黄连幹薑41.40 g，物质桂枝41.40 g，量值人參27.60 g，传递半夏（湯洗）60.00 g，分析大棗42.00 g於砂鍋中，经典基准加2000 mL水，名方浸泡60分鍾，黄连以武火（2200 W）煮沸後，物质調節火力至文火（900 W）保持微沸，量值煎煮約60分鍾後，传递趁熱過濾，分析濾液放涼後加水調整體積至1200 mL。经典基准根據最佳工藝進行3批驗證實驗，結果顯示指標性成分黃連堿、巴馬汀、小檗堿、甘草苷、甘草酸、6-薑辣素、桂皮醛平均含量分別為4.52、5.83、15.84、1.70、2.95、1.28、1.39 mg·g-1，RSD分別為0.72%、0.74%、0.71%、0.86%、1.6%、1.3%、0.65%，說明黃連湯工藝穩定。

采用隨機數表法，對各藥味飲片批次進行隨機組合及排序，見表2。按照最佳工藝製備18批黃連湯物質基準對應實物，編號為HLD1~HLD18。

2.2 黃連湯物質基準特征圖譜方法的建立

2.2.1色譜條件

色譜柱：Merck Purospher Star LP RP-18 endcapped色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（含0.05mol·L-1磷酸二氫鉀，磷酸調節pH為3.0，B）；梯度洗脫(0～7 min，10%~22% A；7～19 min，22%～23.5% A；19～28 min，23.5%～24% A；28～42 min，24%～35% A；42～52 min，35%～63% A；52～54 min，63%～10% A；54～56 min，10% A），流速：1 mL·min-1，檢測波長：280 nm，柱溫：25 ℃，進樣體積：10 μL。特征圖譜見圖1。

5.甘草苷；10.黃連堿；11.巴馬汀；12.小檗堿；14.桂皮醛；15.甘草酸；17.6-薑辣素

對黃連湯物質基準特征圖譜進行特征峰歸屬，共歸屬17個特征峰，經對照品指認7個特征峰信息。其中1，2，3，6，7，8，9，10（黃連堿），11（巴馬汀），12（小檗堿）號峰來源於黃連；4，5（甘草苷），15號峰（甘草酸）來源於甘草；13，14（桂皮醛），16號峰來源於桂枝；17號峰（6-薑辣素）來源於幹薑；人參、半夏、大棗在此條件下沒有色譜信息，後續將進行進一步研究。

2.2.2供試品溶液的製備

精密量取黃連湯物質基準對應實物2 ml至10 ml量瓶中，加入甲醇7 mL，再加水至刻度，使甲醇濃度為70%，稱定重量，超聲30分鍾，放冷，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。同法製成各單味藥、各陰性供試品溶液。

2.2.3 精密度考察

取同一供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件，連續進樣6次。以小檗堿為參照峰，計算各共有峰相對保留時間和相對峰麵積RSD，結果各共有峰相對保留時間RSD＜0.39%，相對峰麵積RSD＜2.8%，表明儀器精密度良好。

2.2.4 重複性考察

取同一份黃連湯物質基準對應實物，按2.2.2項下平行製備6份供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件進樣。以小檗堿為參照峰，計算各共有峰相對保留時間和相對峰麵積RSD，結果各共有峰相對保留時間RSD＜0.65%，相對峰麵積＜2.8%，表明方法重複性良好。

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