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响应面优化缅甸刺梧桐胶多糖制备工艺(一)

来源:时间:2025-04-22 05:06:46

刺梧桐膠(Karayagum,面优Sterculiagum)是化缅來源於梧桐科(Sterculiaceae)、蘋婆屬(Sterculia)高大的甸刺刺蘋婆樹以及其他蘋婆屬樹種的樹幹分泌物,同時在胭脂樹科(bixacene)的梧桐cochlospermumgessypiuma.PDe及其他cochlospemum屬的樹幹中也可以提取到刺梧桐膠。刺梧桐膠主要分布於非洲的胶多蘇丹、印度、糖制巴基斯坦,备工在緬甸和我國雲南也有大量采膠樹種分布。面优刺梧桐膠屬於部分乙酰化的化缅弱多糖,具有複雜的甸刺多支鏈結構,相對分子質量高達900萬以上,梧桐經水解產生半乳糖,胶多鼠李糖和半乳糖醛酸以及少量的糖制葡萄糖醛酸。全世界超過90%的备工刺梧桐膠都應用於製藥工業,利用其吸水溶脹性和黏性以及一定的面优腹瀉治療作用,主要用作緩釋控釋胃腸道給藥載體。刺梧桐膠也用作食品增稠劑。研究發現增稠劑的適量應用可以顯著提高熱風幹燥方便麵的吸水率、蒸煮損失、硬度、膠著性、咀嚼性等綜合品質。也有研究表明,使用刺梧桐膠粉包紮傷口,增加了正常肉芽組織,也使表皮生長良好。

本研究以緬甸刺梧桐膠樣品為試材(市麵上以商品名“雪燕”進行銷售),通過探討超聲堿提法優化刺梧桐膠多糖的提取工藝,為刺梧桐膠多糖的進一步開發應用提供理論基礎。

一、材料與方法

1、材料與儀器

實驗所用刺梧桐膠購自緬甸曼德勒,經雲南中醫藥大學趙榮華教授鑒定為梧桐科蘋婆屬植物刺蘋婆樹幹分泌物。

葡萄糖(分析純)購於北京索萊寶科技有限公司;三氯甲烷、正丁醇、濃硫酸、苯酚、氫氧化鈉均為國產分析純;乙醇(95%)購於昆明灌澈試劑有限公司;實驗用水為純淨水和超純水。

SK7210HP超聲清洗器:上海科導超聲儀器有限公司;bioMate3S紫外分光光度儀:美國thermoFisher公司;Dl-5-b離心機:深圳安科高技術股份有限公司:SaGa-10tF超純水機:南京易普易達科技發展有限公司。

2、方法

(1)單因素試驗

①naoH濃度對刺梧桐膠多糖得率的影響

刺梧桐膠粉末中分別加入液料比為100:1(ml:g)的0.02moll、0.04mol/l、0.06mol/l、0.08mol/l、0.1moll的naoH溶液,超聲提取1.5h,考察naoH濃度對刺梧桐膠多糖得率的影響。

②超聲時間對刺梧桐膠多糖得率的影響

刺梧桐膠粉末中分別加入液料比為100:1(ml:g)的0.06mol/l的naoH溶液,分別超聲提取0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h,考察提取時間對刺梧桐膠多糖得率的影響。

③料液比對刺梧桐膠多糖得率的影響

刺梧桐膠粉末中加入40:1(ml:g)、60:1(ml:g)、80:1(ml:g)、100:1(ml:g)、120:1(ml:g)的0.06mol/lnaoH溶液,超聲提取1.5h,考察液料比對刺梧桐膠多糖得率的影響。

(2)響應麵實驗設計

在單因素試驗基礎上,以刺梧桐膠多糖得率為響應值,選響應麵box一benhnken試驗設計對超聲提取刺梧桐膠中多糖的工藝參數進行優化。

(3)刺梧桐膠多糖的製備

對超聲提取的刺梧桐膠多糖進行中和,濃縮處理,然後加入95%乙醇醇沉過夜,離心分離幹燥後得刺梧桐膠多糖(即刺梧桐膠多糖a)。

將刺梧桐膠多糖a采用Sevag法脫蛋白。最後得到的多糖液加入乙醇進行醇沉,重複3次以除去Sevag試劑,最後得到脫脂脫蛋白的刺梧桐膠多糖(即刺梧桐膠多糖b)。

(4)多糖得率的測定

①標準曲線的繪製

將無水葡萄糖置於105℃烘箱中恒重,精密稱定無水葡萄糖對照品10mg,置100ml容量瓶中,用超純水溶解並加至刻度,搖勻,即得。采用苯酚–硫酸顯色法,精密量取對照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml,分別置15ml具塞刻度試管中,各加水至2.0ml,搖勻,加入5%苯酚溶液1ml(臨用配製),搖勻。再加人濃硫酸5ml,混勻,冷卻,放入40℃水浴中加熱15min,取出,冷卻。以超純水為空白,使用酶標儀在488nm波長處測定吸光度,以吸光度值為縱坐標,葡萄糖標準液質量濃度為橫坐標,得到方程y=2.1858x+0.1294,r2=0.999。

②樣品測定

精密稱取響應麵法所得的幹燥刺梧桐膠多糖b粉末各10mg,加超純水溶解並定容至100ml容量瓶中,搖勻。各量取3份1.0ml供試品溶液分別置15ml具塞幹燥試管中,照標準曲線的繪製項下的方法,自“加水至2.0ml”起,依法測定吸光度。通過標準曲線線性方程計算刺梧桐膠多糖的得率。

3、數據統計分析

響應麵box-benhnken試驗采用Design一expertV8.0.6.1軟件進行設計與分析。

二、結果與分析

1、單因素考察

(1)naoH濃度對刺梧桐膠多糖得率的影響

naoH濃度對刺梧桐膠多糖得率的影響見圖1。隨著naoH濃度的增加,多糖的得率先升高後降低,當naoH濃度達到0.06mol/l時,多糖得率達到最大。這可能是由於適宜的naoH濃度可以增加刺梧桐膠多糖的溶出率,而當naoH濃度過大時,可能會破壞多糖結構。因此,naoH濃度選擇0.06mol/l。


(2)超聲時間對刺梧桐膠多糖得率的影響

超聲時間對刺梧桐膠多糖得率的影響見圖2。隨著超聲時間的增加,多糖的得率先升高後降低,當超聲時間達1.5h時,多糖得率達到最大。這可能是由於超聲能加快多糖溶出,但長時間的超聲可能會破壞多糖結構。因此,超聲時間選擇1.5h。

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