甘草為豆科甘草屬烏拉爾甘草、面优脹果甘草或光果甘草的化超化研幹燥根和根莖，多生長在幹旱、声提半幹旱的取甘草原、沙漠或丘陵地帶，草渣是总黄一味常用大宗藥材，被稱為“國老”，酮工在中醫裏有“十方九草”之說，艺及不僅本身具有補脾益氣、抗氧清熱解毒、面优祛痰止咳、化超化研緩急止痛、声提抗氧化、取甘保肝和增強記憶力的草渣功效，還在中藥配伍中具有調和諸藥，总黄以增加藥效的作用。
目前，從甘草中分離出的化合物有400多種，其中黃酮類化合物含量最多，且生物活性較強，其因連有異戊烯基，使得其脂溶性增加，具有抗炎、抗氧化抗病毒川、抗腫瘤、抗抑鬱、鎮靜和鎮痛等功能，並對人類免疫缺陷病毒有較強的抑製增殖作用，其潛在的藥用價值巨大。目前的提取方法主要有：有機溶劑提取、堿性稀醇或堿性水提取、超聲提取、微波提取、超臨界萃取、酶解提取等方法。其中超聲提取法是不僅高效、省時、低成本，而且超聲波具有空化作用、熱效應和機械攪拌等作用，在提取天然物質時，對有效成分的破壞性小。
甘草渣是提取甘草酸後剩餘的藥渣，有研究表明其中含有大量的黃酮類物質，為了更高效的利用藥材，本實驗以甘草渣為研究對象，對超聲輔助提取其總黃酮的工藝進行了研究，得到最優提取條件，並對其抗氧化能力進行了考察，以期對今後甘草的利用和開發提供參考。
一、實驗儀器與材料
1、實驗材料與試劑
無水乙醇、氫氧化鉀：天津市永大化學試劑有限公司；硫酸亞鐵：天津市博迪化工股份有限公司；水楊酸：天津市百世化工有限公司；雙氧水：天津歐博凱化工股份公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）：日本光和純藥；維生素C：北京索萊寶科技有限公司；鐵氰化鉀：天津市科密歐化學試劑有限公司；三氯乙酸：天津市永大化學試劑有限公司；以上試劑均為分析純。甘草苷：濰坊華植生物科技有限公司；甘草購於石家莊某公司。
2、儀器
KQ5200DE型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；SZF-06A型快速提取儀：上海新嘉電子有限公司；R201C型真空旋轉蒸發儀：上海亞榮生化儀器廠；TGL-10B型高速台式離心機：上海安亭科學儀器廠；UV-6000PC型紫外可見分光光度計：上海元析儀器有限公司；DZF-6050型真空幹燥箱：上海博訊實業有限公司；B-260型恒溫水浴鍋：上海亞榮生化儀器廠。
3、方法
（1）甘草苷對照品的配置
準確稱取甘草苷15mg置於25mL容量瓶中，加入70%乙醇溶液至刻度，製成濃度為0.6mg/mL的甘草苷對照品溶液，置於4℃條件下，備用。
（2）甘草渣中總黃酮的提取
取適量甘草，粉碎，過60目篩後準確稱取100.0g於燒杯中，加入含0.3%氨水的60%的乙醇水溶液500mL，80℃回流提取2次，每次2h，過濾後濾渣即為甘草渣，幹燥後備用。
準確稱取備用甘草渣2.0g於容器中，加入70%乙醇溶液，超聲處理後，在一定溫度下進行回流提取。過濾後5000r/min離心10min，取上清液進行濃縮、再用70%乙醇溶液進行溶解定容至25mL即為樣品溶液，置於4℃條件下，備用。
（3）總黃酮的測定
準確移取不同梯度濃度的對照品溶液於25mL的容量瓶中，加0.5mL的氫氧化鉀溶液（10%），震蕩使混合均勻，室溫下放置10min，70%乙醇溶液定容。以70%乙醇溶液作為空白對照，在400nm處測定其吸收值。以對照品溶液的濃度為橫坐標，對應的吸光度值為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y=0.01799X+0.05153，R2=0.9991，結果表明在濃度為6ug/mL～60μg/mL的範圍內，其濃度與吸光度呈良好的線性關係，見圖1。
移取0.8mL樣品溶液於25mL的容量瓶中，重複上述操作，測得其吸收值，帶入回歸方程中，得出其總黃酮的含量，按照公式（1）計算收率。
（4）單因素試驗
①料液比對甘草渣總黃酮收率的影響
精確稱取2.0g甘草渣，分別以料液比1:25（g:mL）、1:30（g:mL）、1:35（g:mL）、1:40（g:mL）和1:45（g:mL）的比例加入70%乙醇溶液，超聲30min，在60℃下回流提取2h。
②超聲時間對甘草渣總黃酮收率的影響
精確稱取2.0g甘草渣，以料液比1:35（g:mL）的比例加入70%乙醇溶液，分別超聲10min、20min、30min、40min、50min和60min，在60℃下回流提取2h。
③提取時間對甘草渣總黃酮收率的影響
精確稱取2.0g甘草渣，以料液比1:35（g:mL）的比例加入70%乙醇溶液，超聲40min，在60℃下分別提取lh、2h、3h和4h。
④提取溫度對甘草渣總黃酮收率的影響
精確稱取2.0g甘草渣，以料液比1:35（g:mL）的比例加入70%乙醇溶液，超聲40min，分別在50℃、60℃、70℃、80℃和90℃下提取2h。
（5）響應麵優化實驗
在單因素試驗的基礎上，選擇超聲時間、提取時間和提取溫度為自變量，以提取率為響應值，進行Box-Behnken響應麵實驗設計，每個因素取3個水平，所有實驗重複3次。具體因素實驗水平見表1。
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