(2)高效液相色譜儀：包括：流動相傳輸係統(雙泵梯度洗脫係統)、农药具40μL定量環的选择性多進樣器、保護柱(直接與預填充的残留C18柱連接)、柱溫箱或柱加熱器(保持柱恒溫)、农药分析柱[25cm×4.6mm(內徑)，选择性多填充十八碳矽烷鍵合的残留粒狀顆粒(ODS，C18)，农药如EconosphereC18]、选择性多柱後光解、残留衍生單元[包括：用於光解的农药紫外燈，配備電源，选择性多17cm×9mm(外徑)；Teflon光解燈套管，残留25’×0.5mm(內徑)線圈，农药將Teflon管盤繞在燈上，选择性多一端與T形混合器相連，残留另一端與柱連接；用於OPA-MERC溶液的低流速泵，連接錐形線圈，在泵和0.5mm(內徑)Tefton管問作為脈衝阻尼器，與T形混合器相連；T形混合器，不鏽鋼，0.25mm孔徑，標準1/16”；反應線圈，10’×0.5mm延遲線圈，一端與T形混合器相連，另一端連接檢測器]、熒光檢測器。
3、測定條件：用單泵或雙泵，以0.002mol/LNaH2PO4-甲醇(9∶1)為流動相，0.3mL/min洗柱過夜。流動相改為10％甲醇-水(高效液相色譜級)，1mL/min運行30min。如果使用幾天後色譜基線出現漂移，重複此過程。
保持分析柱溫35℃，用40％甲醇水1mL/min平衡係統，OPA-MERC溶液以0.2mL/min加入T形混合器，OPA-MERC溶液開始流動時，打開紫外燈，穩定檢測器。
進檢測溶液或標準溶液後，從40％甲醇一水到80％甲醇一水開始30min的線性梯度洗脫，檢測器激發波長為340nm，發射波長為455nm。調節檢測器靈敏度，使1.0μg/mL敵草隆溶液40μL的響應為記錄儀或積分儀量程的50％。此條件下敵草隆的洗脫時間約為24min。
每天使用後，用80%甲醇一水衝洗色譜柱20min，色譜柱也可在此重要條件下儲存。
三、苯並咪唑類殺菌劑的多殘留分析
(一)方法原理與適用性
用甲醇提取，提取液酸化後，通過液液分配法轉移到二氯甲烷中，然後將提取液堿化。分離殘留，並用配有紫外和熒光檢測器的反相離子對高效液相色譜法進行定量分析。
該方法適於蔬菜和水果中脲基甲酸鹽、多菌靈(由於使用苯菌靈、多菌靈或甲基硫菌靈而得)和涕必靈的殘留測定。紫外檢測器對適用該方法的所有的殘留農藥都有響應，而熒光檢測器僅對多菌靈和涕必靈有響應。采用已給的方法分析樣品中的殘留會將樣品中的幹擾物質與殘留農藥一並提取出來。將此方法變動以適用於咖啡豆的分析，但僅限於對多菌靈的分析。
該方法對於所測定的各種農藥的定量限都是0.1mg/L。紫外檢測器是非選擇性的，易受作物的幹擾，因此定量限可能受某種樣品的影響。對於涕必靈，使用熒光檢測器，在最大吸收波長條件下，該化合物的定量限可至0.01mg/L。
(二)標準溶液配製
分別用丙酮配製25μg/mL的脲基甲酸鹽、多菌靈、涕必靈和甲基托布津的儲備液(不用苯菌靈配製儲備液，是因為該溶液靜置過夜時，完全降解為多菌靈)。標準品溶液在丙酮和高效液相色譜儀(HPLC)流動相中穩定。
混標的配製：從已配好的儲備液中，各取出1mL混合後，在30～40℃的微熱下以氮氣流揮發溶劑至幹，然後加入4.0mL甲醇溶解，再加入6.0mL高效液相色譜離子對溶液，
混勻，得各種標準品的最終濃度均為2.5μg/mL。
(三)提取
稱取50g已切碎的樣品於500mL具塞錐形瓶中，加入100mL甲醇，在機械振蕩器上振蕩10min。如分析香蕉(整個或僅果肉部分)，則在機械振蕩器上振蕩之前，先用手用力將其搖勻。
用裝有濾紙的布氏漏鬥將上述溶液過濾至真空濾瓶中，然後用50mL甲醇衝洗錐形瓶和濾紙上的殘渣。轉移濾液於500mL分液漏鬥中，加10mL1mol/L鹽酸和100mL1％NaCl溶液，混勻，冷卻。每次用100mL二氯甲烷劇烈振蕩提取濾液兩次，每次提取1min。將二氯甲烷層過約70g無水硫酸鈉柱(脫水)，用圓底燒瓶收集柱流出液。甲醇水溶液層仍保存在分液漏鬥中，留待以後提取用。用50mL二氯甲烷淋洗硫酸鈉柱，並收集在圓底燒瓶中。用真空旋轉蒸發器在≤30℃的水浴中，揮發圓底燒瓶中的二氯甲烷，至幹。加入4mL甲醇溶解提取物，該提取物中含有脲基甲酸鹽、甲基硫菌靈、涕必靈和多菌靈。
將分液漏鬥中的甲醇水溶液層全部轉移到燒杯中，用水衝洗分液漏鬥兩次，每次10mL，洗液倒入燒杯中。
用5mol/L和1mol/L的NaOH(如需要，可用1mol/L鹽酸)調節燒杯中提取液的pH至7.5～8。在調節溶液的pH時，切勿使溶液呈強堿性。
再將燒杯中溶液倒入分液漏鬥中，用二氯甲烷激烈振蕩提取兩次，每次100mL，每次提取1min。
將二氯甲烷層過約70g無水硫酸鈉柱，用圓底燒瓶接收柱淋出液(前麵用於幹燥二氯甲烷的無水硫酸鈉柱可再次使用)。用50mL二氯甲烷淋洗硫酸鈉柱，並收集在圓底燒瓶中。
在真空旋轉蒸發器上，揮發二氯甲烷提取液至幹，用4mL甲醇溶解提取物。至此，已將大部分的多菌靈和涕必靈提取出。
(四)淨化
本方法目前沒有可以參考的淨化方法。
(五)測定
1、原理苯並咪唑類殺菌劑的殘留采用離子對反相色譜進行分析。多菌靈和涕必靈在酸性流動相中被離子化與由癸烷基磺酸鈉產生的帶負電荷的反離子形成離子對，以控製高效液相色譜係統的選擇性，並從樣品提取物中的幹擾物中分離出待分析物。根據反相色譜的原理，在該條件下的色譜柱中呈中性的甲基脲酸鹽和甲基硫菌靈將不受流動相改變的影響。
紫外檢測器和熒光檢測器均對多菌靈和涕必靈有響應，紫外檢測器還對甲基硫菌靈和脲基甲酸鹽響應。
2、儀器
儀器包括：流動相輸送係統(為恒流泵)、進樣器(帶有≥25μL定量環的自動樣品進樣閥)、色譜柱[25cm×4.6mm(內徑)，與矽鍵合的C18柱，粒徑5μm，適於大多數堿性化合物的分析]、與色譜柱配套的保護柱(與矽鍵合C18柱的填料相同)、柱溫箱(可容納保護柱和色譜柱)、可變波長紫外檢測器或二極管陣列檢測器(且裝有約8μL的流通池)、記錄儀(譜線記錄儀或適於各種檢測的計算積分儀)。
3、測定條件
(1)流動相：離子對溶液和甲醇以65∶35的比例混合(切勿用泵混合流動相，因為混合時的放熱反應所產生的氣泡使泵不能穩定地工作)。在使用前，要邊用磁力攪拌子劇烈攪動溶液，邊通人氦氣進行脫氣。
(2)離子對溶液：離子對溶液中含4.1mmol/L1-癸烷磺酸鈉鹽(純度為98％)。移取7.0mL磷酸(85%)於200mL高效液相色譜純的水中，在該溶液中加1.0g1-癸烷磺酸鈉鹽。再移取10.0mL三乙胺(99％)於溶液中，並用高效液相色譜純的水稀釋至1L。過＜1μm的微孔濾膜(溶液的pH應約為2.4)。
(3)甲醇：甲醇須經全玻璃蒸餾器蒸餾。
(4)水：水為高效液相色譜純的水，市售或采用製備蒸餾水、去離子水的純水裝置製得。該水的電阻值務必＞12MΩ/cm。
(5)檢測器的連接：將熒光檢測器與紫外檢測器串聯在一起。設柱溫箱溫度為40℃，用流動相以1.5mL/min的流速平衡係統30min以上或直到所得4個分析物的保留時間是一個常量。
(6)色譜柱：如長時間(≥24h)不用，則用50％的甲醇-水溶液洗色譜柱；如短期內不用，則用低流速(0.10～0.2mL/min)的流動相清洗色譜柱以防止鹽沉積。
為了去除柱中殘留量高的樣品組分，在50％的甲醇一水溶液洗色譜柱後，用甲醇洗色譜柱。在輸人流動相之前，再用50％的甲醇-水溶液洗色譜柱。加入甲醇前，必須用水衝洗色譜柱中的流動相，以避免鹽沉積可能會堵塞係統。
(7)紫外檢測器紫外檢測器吸收波長開始設為250nm，在淋洗完脲基甲酸鹽後，將波長設為280nm，並將基線調至零起始線測定甲基硫菌靈、多菌靈和涕必靈。調整檢測器和(或)記錄儀的靈敏度，使每個標準品(62.5ng/25uL)響應均為滿刻度的40％～70％。
(8)熒光檢測器：熒光檢測器的激發波長設為280nm(狹縫寬為20nm)，發射波長設為310nm(狹縫寬為10nm)。調整檢測器、衰減和(或)記錄儀的靈敏度，使62.5ng/25μL的多菌靈響應為滿刻度的60％～80％，而在此條件下，62.5ng/25μL涕必靈的響應則為滿刻度的40％～50％。
另外，還可使用可程序改變波長熒光檢測器和可程序改變波長或二極管陣列紫外檢測器，以在最佳波長條件下進行殘留測定。
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