驗利用牛津杯抑菌圈法測定植物乳杆菌ZJ316、益生副幹酪乳杆菌ZFM54、乳酸沙克乳杆菌ZFM225的菌筛抑菌性質。將活化後的选及响3株乳酸菌，按3％的其对接種量接至草石蠶菜汁培養基。於37℃培養24h。草石蚕汁草石蠶發酵液於8000r/min離心5min(4℃)，发酵取上清液備用。特性將抑菌試驗所需的益生指示菌在合適的培養條件下培養，按1％的乳酸接種量接入50℃左右融化的半固培養基中，混合均勻後倒入牛津杯的菌筛平板上，待完全冷卻後拔出牛津杯。选及响用移液槍吸取150μL發酵上清液加入孔洞中，其对37℃培養12h後用遊標卡尺測量抑菌圈大小。草石蚕汁
定利用德國拜發IFP維生素B9葉酸微生物法試劑盒對發酵樣品中的发酵葉酸含量進行測定。按試劑盒中說明書要求對樣品進行處理，將處理後的樣品與培養基加入試劑盒自帶的微孔板中，用粘合箔封緊後於37℃黑暗條件下培養48h。培養完成後從培養箱中取出微孔板，再次壓緊粘合膜並在桌麵上震蕩，使微生物在培養基中混合均勻。隨後輕輕撕下粘合膜，破壞微孔中的所有泡沫，並用酶標儀在波長540nm處測定微孔的0D540nm值。
將活化後的植物乳杆菌ZJ316、沙克乳杆菌ZFM225、副幹酪乳杆菌ZFM54按3％的接種量接種於草石蠶菜汁培養基中，37℃培養24h後取10mL裝入15mL頂空進樣瓶中。將頂空進樣瓶放到50℃水浴鍋內加熱30min，備用。
將老化後的萃取頭插入進樣瓶頂空部分，50℃平衡30min、吸附30min後，將萃取頭取出並插GC進樣口。同時啟動儀器采集數據，解吸20min。
7890A/5975GC，MS聯用儀；色譜柱：HP-5MS型(30m×0.250mm×0.25μm)；載氣：氦氣；進樣溫度：230℃；進樣量：1μL；升溫程序：初溫45℃保持2min，以5℃/min速率上升至180℃，保持1min後以25℃/min速率升到230℃，保持5.5min。
由計算機質譜係統NSIT檢索未知化合物。匹配度大於70％的結果將予以報告，采用麵積歸一法計算各成分的含量。
上述所有試驗均重複3次。所有數據均表示為平均值±標準偏差。數據分析使用Origin9.0處理。
乳酸菌在草石蠶菜汁培養基中的生長情況，不僅能夠反映出乳酸菌對草石蠶菜汁發酵環境的適應能力，也是乳酸菌發酵性能分析的基礎，因此本研究通過生長情況測定初步篩選出優質乳酸菌菌株。如圖1所示，培養24h後，植物乳杆菌ZJ316、副幹酪乳杆菌ZFM54、沙克乳杆菌ZFM225在草石蠶菜汁培養基中生長情況最好，0D600nm、值分別為1.84，1.64，1.58，本研究選擇這3株乳酸菌進行後續試驗。
接種量的多少與乳酸菌在培養基中生長情況密切相關，過小的接種量會導致乳酸菌生長密度偏低，而接種量過高則會出現營養匱乏導致菌體死亡的現象，因此確定一個最優的接種量非常重要。如圖2所示，植物乳杆菌ZJ316在3％接種量處有最高活菌數8.7×108CFU/mL、沙克乳杆菌ZFM225在3％接種量處有最高活菌數1.7×108CFU/mL、副幹酪乳杆菌ZFM54在3％接種量處有最高活菌數2.3×108CFU/mL。因此，植物乳杆菌ZJ316、沙克乳杆菌ZFM225、副幹酪乳杆菌ZFM54的最佳接種量均為3％。
如圖3所示，本次研究篩選出3株益生功能型乳酸菌ZJ316、ZFM225、ZFM54均能很好的適應草石蠶菜汁培養基的發酵環境，這3株乳酸菌均在培養8h達到指數生長期，16h達到平穩期。其中以植物乳杆菌ZJ316的生長情況最為良好，培養24h後0D600nm值可達到1.824。
如圖3所示，本次研究篩選出3株益生功能型乳酸菌ZJ316、ZFM225、ZFM54均能很好的適應草石蠶菜汁培養基的發酵環境，這3株乳酸菌均在培養8h達到指數生長期，16h達到平穩期。其中以植物乳杆菌ZJ316的生長情況最為良好，培養24h後0D600nm值可達到1.824。
聲明：本文所用圖片、文字來源《中國食品學報》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題，請與本網聯係
相關鏈接：乳酸菌，植物乳杆菌，葉酸，維生素B9
