瑪咖是相萃一種十字花科獨行菜屬草本植物，可以藥食兩用，取法我國衛生部2011年正式審批瑪咖粉為新資源食品。玛咖研究表明瑪咖可以抗疲勞，多糖的工增強體質，艺研其中瑪咖多糖可以提高機體的相萃耐力，具有抗疲勞、取法抗氧化的玛咖功效。因此開展與瑪咖及其提取物相關的多糖的工研究，對其進一步的艺研開發、推廣利用有著深遠的相萃意義。
目前，取法多糖的玛咖傳統提取工藝為乙醇沉澱法，此方法雖然能提取出大量的多糖的工多糖，但是艺研存在提取不徹底，原料利用率低，乙醇用量大等問題。三相萃取法提取多糖可以避免醇沉工藝的缺點，其原理是通過在水提液中加入無機鹽和有機溶劑使其形成三相，上相為有機層，主要是色素、脂類等極性較小的物質，中間相為蛋白質層，下相為水層，主要是一些水溶性物質。提取結束後，提取液中的有機溶劑和無機鹽都可回收，是一種綠色高效提取多糖的工藝。本實驗采用用叔丁醇-（NH4）2SO4-提取液三相體係萃取瑪咖多糖，並通過響應麵試驗優化提取工藝，並分析瑪咖多糖的抗氧化活性，為瑪咖的提純和開發利用提供科學的參考依據，能讓其發揮最大的市場經濟價值。
一、材料與方法
1、儀器與試劑
RV10型旋轉蒸發儀：德國IKA公司；LD-10型冷凍幹燥機：湖南博瑞德生物有限公司；YT-1型分光光度計：無錫尚科儀器有限公司；TENSORII傅裏葉變換近紅外光譜儀：德國BrukerOptics公司。
2、樣品來源
實驗所需瑪咖隨機購於當地藥材市場。
3、實驗方法
（1）瑪咖多糖三相萃取工藝流程
瑪咖→粉碎→蒸餾水提取→水提液濃縮→加入（NH4）2SO4、叔丁醇→混勻→靜止萃取→分離、冷凍幹燥→瑪咖多糖
（2）瑪咖多糖三相萃取工藝要點
蒸餾水提取：將10g瑪咖粉按料液比1:30（g/mL）加入蒸餾水，50℃水浴30min，提取1～4次。水提液濃縮：將提取液在50℃條件下旋轉蒸發，濃縮至100mL。加入（NH4）2SO4、叔丁醇：在提取液濃縮中加入10%～50%添加量的（NH4）2SO4，再加入5～25mL的叔丁醇，形成三相體係。
混勻、靜止萃取：充分混勻後，於20℃～60℃溫度下靜置萃取60min。分離、冷凍幹燥：萃取後，形成三相；上層為叔丁醇相，主要含有脂類物質，黃酮類；中間為相為蛋白質；下層為（NH4）2SO4相，主要含有瑪咖多糖，並通過分子透析法除去無機鹽後冷凍幹燥得到瑪咖多糖。
（3）瑪咖多糖提取率的計算
采用苯酚-硫酸法測多糖含量，以外標法測定瑪咖多糖質量，並計算得到多糖提取率，計算公式如下：
瑪咖多糖提取率/%=（瑪咖多糖質量/瑪咖粉質量）×100
（4）單因素實驗對瑪咖多糖提取條件的優化
實驗稱取10g瑪咖粉，以水提法分別提取1、2、3、4次，合並提取液濃縮至100mL，以三相萃取法提取瑪咖多糖，提取濃縮並冷凍幹燥後製得瑪咖多糖，測定瑪咖多糖含量並計算提取率。分別研究（NH4）2SO4添加量10%、20%、30%、40%、50%，叔丁醇添加量5、10、15、20、25mL，萃取溫度20℃、30℃、40℃、50℃、60℃的條件下，對瑪咖多糖提取率的影響。
（5）響應麵實驗對瑪咖多糖提取條件的優化
根據單因素實驗得到的結果，選取（NH4）2SO4添加量，叔丁醇添加量、萃取溫度3個因素，采用Design-expert8.0軟件進行響應麵實驗設計，試驗因素與水平見表1。
（6）瑪咖多糖清除·OH能力的測定
參照水楊酸法，分別取0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL、3.0mg/mL、4.0mg/mL瑪咖多糖溶液各2mL置於10mL的試管中，再加入2mL硫酸亞鐵（0.005moL/mL）、2mLH2O2，靜置5.0min後，再加入2mL的水楊酸溶液（0.005moL/mL），在37℃溫度下水浴10min，波長510nm條件下測定吸光度X值。X0為空白對照組的吸光度值，X1為蒸餾水代替瑪咖多糖溶液的吸光度值，X2為瑪咖多糖溶液的吸光度值，並以維生素C作為對照組，·OH清除率計算公式如下所示：
（7）瑪咖多糖清除DPPH·能力的測定
參照相關文獻，準確吸取2mL濃度為0.2mmoI/LDPPH·甲醇溶液置於10mL的試管中，再分別加入濃度2.5mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/m的瑪咖多糖溶液各2mL，並在37℃水浴條件下反應10min，於波長517nm條件下測定吸光度值X。X0為空白對照組的吸光度值，X1為加入瑪咖多糖溶液後吸光度值，並以維生素C作為對照組，DPPH·清除率計算公式如下所示：
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