聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone,高效簡稱為PVP)是液相乙烯一種非離子型高分子化合物,是色谱N-乙烯基酰胺類聚合物中有特色且被研究得最深、最廣泛的法测精細化學品品種之一。PVP作為一種合成水溶性高分子化合物,定隐具有水溶性高分子化合物的形眼一般性質,如膠體保護作用、镜护成膜性、理液粘結性、中聚吸濕性、吡咯增溶或凝聚作用。烷酮但PVP最具特色的高效是其優異的溶解性能及生理相容性,也因此倍受人們重視。液相乙烯PVP不參與人體新陳代謝,色谱又具有優良的法测生物相容性,對皮膚、粘膜、眼等不形成任何刺激。PVP用於隱形眼鏡,可增加鏡片的親水性和潤滑性,這使得PVP在隱形眼鏡護理液中得到了廣泛應用。
GB19192—2003《角膜接觸鏡護理液衛生要求》第4條明確提出對角膜接觸鏡護理液有效成分含量檢測的技術要求。聚乙烯吡咯烷酮作為隱形眼鏡護理液的有效成分之一,應明確其實際加入的有效量,並建立有效、快捷、準確的分析測定方法。
目前PVP含量的測定方法主要有紫外分光光度法、凝膠色譜檢測法,但是這些方法的靈敏度不高,方法條件複雜,操作過程繁瑣,且幹擾不易消除。角膜接觸鏡護理液中基體複雜,樣品的雜質峰幹擾相對嚴重,難以準確定量,目前此樣品尚無有效的檢測方法。筆者采用SAX色譜柱對隱形眼鏡護理液樣品進行分離,在220nm波長處進行PVP的定量分析,經過一係列方法學試驗驗證,證明該方法準確、簡單、高效。
液相色譜儀:U3000型,美國賽默飛世爾科技公司。紫外分光光度計:UV2550型,日本島津儀器有限公司。超純水機:MC24T30CN型,出水電阻率為18.2MΩ,默克密理博(中國)有限公司。電子天平:ME104E型,感量為0.1mg,梅特勒–托利多儀器(上海)有限公司。氯化鈉:色譜純,上海阿拉丁生化科技股份有限公司。PVP對照品:純度(質量分數)不小於99.0%,美國SigmaAldrich公司。角膜接觸鏡護理液樣品:市售。
檢測器:二極管陣列檢測器;色譜柱:OligoSAX強陰離子交換柱(150mm×4.6mm,5μm,美國賽默飛世爾科技公司);流動相:20mmol/L氯化鈉水溶液;流量:1.0mL/min;柱溫:30℃;波長:220nm;進樣體積:10μL。
根據角膜接觸鏡護理液樣品中PVP的標示含量,若PVP標示含量在0.01~0.5mg/mL之間,可直接進樣;若PVP標示含量大於0.5mg/mL,取適量護理液樣品,用超純水稀釋至約0.05mg/mL,作為供試液,待測。
PVP標準溶液:準確稱取PVP對照品約0.1g,用超純水配成1mg/mL的儲備液。
PVP係列標準工作溶液:采用逐級稀釋法,用超純水配製PVP質量濃度分別為0.01、0.025、0.050、0.10、0.25、0.50mg/mL的係列標準工作溶液。
常規檢測中,一般采用普通的C18反相色譜柱進行物質分離,而大分子量的樣品,采用凝膠尺寸排阻色譜進行分離。試驗考察了TSK-Gelα3000型親水性凝膠色譜柱(300mm×7.8mm,7μm,日本TSK公司)和Oligo-SAX強陰離子交換柱的分離效果,結果發現,采用TSK-Gelα3000型凝膠色譜柱進行分離時,峰形拖尾嚴重且不對稱,而在OligoSAX強陰離子交換色譜柱下,PVP能實現完好的分離,且無拖尾現象產生。因此采用Oligo-SAX強陰離子交換柱進行檢測分析,可快速有效地分離PVP。
當采用純水作為流動相時,色譜峰雖能分離,但出現拖尾現象,因此需要配製一定的緩衝溶液對PVP進行洗脫。試驗采用氯化鈉溶液作為流動相,考察氯化鈉的質量濃度分別為0、10、20、50、100mmol/L時對PVP含量測定的影響,結果發現當溶液中氯化鈉的質量濃度為20mmol/L時,拖尾現象消失,但隨著氯化鈉濃度的增大,PVP的分離沒有其它變化。為了延長色譜柱的壽命,宜選用較低濃度的流動相,因此,采用20mmol/L氯化鈉溶液作為流動相較為適宜。
分別取PVP標準工作溶液與空白基質溶液(按照隱形眼鏡護理液的配方,配製不含PVP的隱形護理液作為空白基質溶液),在波長為200~300nm範圍內進行掃描,結果顯示PVP在波長220nm附近有較大吸收,且空白基質溶液吸收較小,因此選擇220nm作為PVP含量的檢測波長。
按照1.2儀器工作條件,對0.05mg/mLPVP標準溶液和待測護理液的供試液進行測定,色譜圖分別見圖2和圖3。由圖2和圖3可知,PVP的保留時間為0.933min。
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