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高效液相色谱法(五)

来源:时间:2025-04-21 20:34:57

手動進樣閥通常有美國某公司生產的高效7725型、7725i型、液相9725型、色谱9725i型進樣閥。高效7725型的液相閥體為不鏽鋼材料製成,i表示這種進樣閥具有觸發同步信號線。色谱每進樣一次,高效自動啟動工作站。液相還有一種電動進樣閥,色谱由電動機控製裝樣狀態,高效每次進樣完畢,液相樣品進入分析柱一定時間後i電動機自動將閥置於裝樣狀態。色谱在實際分析中,高效還可以使用十通閥,液相在線對兩根色譜柱進樣。色谱

現在生產的高效液相色譜儀都可以選配自動進樣器裝置。自動進樣器在程序控製器或計算機控製下可自動完成取樣、進樣、清洗等一係列操作,使用者隻需預先編製程序,將處理好的樣品按順序裝人儲樣裝置即可。自動進樣器的優點是可以提高工作效率,延長有效工時。這一點在梯度洗脫、多殘留分析或方法建立時非常有用;缺點是價格較貴,故障率高,維修困難,樣品瓶需要嚴格的清洗程序。

3、分離係統

高效液相色譜法的分離係統包括保護柱、色譜柱及柱恒溫箱,是高效液相色譜儀的核心部位。保護柱起到保護色譜柱的作用,固體微粒、汙染物首先被保護柱阻擋。保護柱可以定期清洗或更新。當發現有鬼峰或分離度下降時,首先應考慮保護柱是否被汙染。保護柱和色譜柱要配套使用,填料一致,才能真正起到保護作用,即C18色譜柱就要用C18保護柱。通用型的保護柱一般與色譜柱通過管路連接,也有一體式的保護柱套直接同色譜柱對接。色譜柱又是核心的核心,起到對進入色譜係統混合組分分離的作用,即混合組分從色譜柱進口剛進入時,各組分都站在同一條起跑線上,經分離後,從柱尾端洗脫出,逐一進入檢測係統。

4、檢測係統

檢測係統一般由獨立的檢測器或附屬部件構成,其功能是將物理或化學特性轉變為可處理的電信號,如紫外檢測器、熒光檢測器、電化學檢測器、質譜檢測器。

5、計算機控製和數據處理係統(含工作站)

該係統一般由控製硬件和軟件、數據處理軟件包及計算機組成。現代高效液相色譜儀都通過計算機來控製或進行數據處理。除標準化的要求以外,不同的生產廠家開發出各自的數據處理或工作站軟件,通用性較差。數據處理軟件一般隻有數據采集和處理、編製並打印報告的功能,如國產軟件N2000。工作站軟件除具備前者功能外,還有設置儀器分析參數、操縱控製儀器設備及複雜的後處理功能,如某公司的Empower3、AgiIentHPLC化學工作站軟件等。現代大型工作站軟件包都可以根據儀器不同配置進行安裝設置,且具有遠程控製功能。計算機與儀器的通信已逐步采用了以太網卡連接,這樣成本低,通用性更強。

二、流動相和固定相

(一)流動相

流動相是影響分離的一個重要調節因素。一種理想的液相色譜流動相溶劑應具有低黏度、檢測器兼容性好、容易回收、低毒等特性。為了獲得較好的分離和選擇性,流動相常采用改性劑,農藥殘留分析應用較多的改性劑有甲酸、乙酸、甲酸銨、乙酸銨等。沒有揮發性的改性劑不能用於質譜、蒸發光散射等檢測器。反相離子對色譜法是分析工作中一項實用技術。

反相高效液相色譜法采用的流動相多為乙腈、甲醇配合水。一般情況下乙腈一水體係能夠滿足多數樣品的分離要求,但甲醇在農藥殘留分析中也是極為重要的洗脫劑。乙腈的特性是黏度低、色譜峰形好,可在較短波長下使用,係統的壓力約為同比例的甲醇的1/2,噪聲小。但乙腈的價格較甲醇約貴10倍。

在分析過程中,有時需要在保持流動相強度和極性不變的情況下,通過采用不同的溶劑來改變選擇性,從而獲得滿意分離。

正相高效液相色譜法流動相常以己烷作基礎溶劑。當洗脫極性較強的組分時,用二氯甲烷、四氫呋喃來調節極性。

對常用流動相的要求:現在能夠購買到大多數HPLC級、PR級的溶劑用於農藥殘留分析,實驗室已很少自行處理製備溶劑。流動相中許多溶劑都有一定毒性,在試驗過程中,注意采取防護措施,譬如具有良好的通風設施並能正常工作。

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