煙堿是強極性的有機物，易溶於水和甲醇，紫外該試驗選取不同濃度的分光法检鹽酸、氫氧化鈉、光度氨水和甲醇考察不同溶劑的测烟萃取效果（表2）。
由表2可知，探讨不同濃度的基于碱甲醇溶液中煙堿含量總體高於氫氧化鈉溶液，與氨水和鹽酸萃取效果無顯著性差異。紫外根據許燕娟等的分光法检研究結果，堿性溶液的光度強度對煙堿萃取率有較大影響，相同濃度下氨水溶液比氫氧化鈉溶液檢測到的测烟生物堿種類多。類似地，探讨Li等用不同濃度氨水萃取煙葉中的基于碱生物堿，發現6%氨水好於其它濃度，紫外也好於氫氧化鈉溶液。分光法检綜合考慮到甲醇溶液相比氨水和鹽酸溶液有利於樣品溶液的儲存和液相色譜柱以及具有較好的抑菌性，因此，采用5%甲醇作為後續試驗的萃取溶劑。
超聲、微波等常用於輔助萃取試驗，然而它們在提高萃取率的同時，也會帶來更多雜質，這對於采用紫外分光光度法檢測非常不利，因此，選擇較為溫和的常溫震蕩法進行萃取。由表3中可以看出，隨著萃取時間的延長，萃取率升高，而在25、30 min時無顯著差異，為保險起見采用30 min作為萃取時間。
原公式以236和282 nm為梯形的中位線法推測雜質在259 nm處的幹擾。由圖1可以看出，由於雜質的幹擾，萃取液的紫外吸收穀底由煙堿的236 nm紅移至240～242 nm處，而與之等距離的是276～278 nm。但從圖1中可以看出，在波長小於278 nm時，4種類型樣品溶液的紫外吸光度與波長形成的斜率較大，為減小誤差而檢測279～282 nm處吸光度。因此，以240、259和282 nm的吸光度用於新公式的擬合。煙堿含量以HPLC法檢測結果為基準。
從表4中吸光度與煙堿含量的相關性結果可以看出，煙堿含量與240 nm相關性接近顯著水平，這是因為煙堿在240 nm有紫外吸收，但又有雜質幹擾造成的；與259 nm處吸光度相關性達到顯著水平，這正是采用該方法原理所在。煙堿與282 nm處的吸光度相關性較差，這是因為煙堿在該處無吸收（圖1），其吸光度是因為雜質的幹擾。而樣品溶液在240、259和282 nm處的吸光度之間呈極顯著相關性，這恰好說明雜質對這3個波長處的吸光度影響一致，這正是原公式建立的基礎。
以20個烤煙樣品在240、259和282 nm處的吸光度為自變量，以HPLC檢測煙堿含量為因變量用SPSS軟件擬合回歸得到擬合方程為：
C=（0.080 7+0.426 9×A259 + 0.473 9×A240 -0.631 2×A282）V/m
式中，C為煙堿含量/%，A259，A240和A282分別為樣品溶液的吸光度，V為樣品溶液體積/L，m為煙樣質量/g。
再分別以2個公式對剩餘57個煙葉樣品煙堿含量進行計算，然後分別將計算結果除以HPLC檢測結果，則比值越接近1說明檢測越準確。由圖3可以看出，全部樣品的原公式計算結果與HPLC檢測結果的比值基本呈正態分布，且在0.75～1.25的部分占49.12%；而烤煙樣品的比值在0.75～1.25的占55.88%，集中度略有提升；對於晾曬煙樣品，其比值也呈正態分布，但集中度較烤煙低，0.75～1.25的僅占39.13%。全部樣品的擬合公式計算結果與HPLC檢測結果的比值基本呈正態分布，0.75～1.25的占61.40%，高於原公式；烤煙樣品的比值在0.75～1.25的占76.47%，集中度有大幅提升；對於晾曬煙樣品其集中度較低，比值在0.75～1.25也是僅占39.13%，但是比值在0.5～0.75和1.25～1.60的分別由17.39%、21.74%提升至26.09%、30.43%。可以看出，2個公式的結果均是烤煙集中度高於晾曬煙，這是因為：1） 2種方法的建立基礎為烤煙，2） 晾曬煙的雜質對吸光度的幹擾有差別。
4種類型煙葉樣品的紫外掃描顯示，3種晾曬煙的圖形一致而與烤煙有差別，表現為峰穀比值前三者較為接近，以及吸收波長大於276 nm後的走勢呈緩慢下降而烤煙的紫外吸收幾乎不變，說明不同煙草類型的雜質對吸收的影響有所差異。通過對不同萃取溶劑的考察發現，甲醇、鹽酸和氨水萃取效率較高，選擇甲醇作為萃取溶劑，是因為較好的抑菌性，並且有利於樣品溶液的保存以及對色譜柱友好。
原公式建立的基礎是朗伯比爾定律即煙堿含量與吸光度成正比。但是在實際測定過程中，由於檢測儀器等的誤差，標準曲線或者擬合曲線一般呈線性關係而非正比關係。另外，該試驗紫外掃描圖和文獻中均顯示煙堿在236 nm處有一定的紫外吸收，而不是無吸收，所以不能將236 nm處的吸光度全部作為雜質。樣品溶液在240、259和282 nm處的吸光度之間存在極顯著相關性說明雜質對這3處的吸光度影響較為一致，這正是2個公式建立的基礎。通過2個公式的計算結果與HPLC結果的比值分布可以發現，對於烤煙樣品，新擬合公式的精確度較原公式有大幅提升；而對於晾曬煙樣品則沒有明顯提升，這是因為2個公式的建立均是以烤煙為基礎而建立的，然而晾曬煙的雜質與烤煙不一樣，這在紫外掃描圖中也有所反映。下一步將收集更多晾曬煙樣品，以建立更適用於它們的計算公式。
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