目的基于:比較不同產地的三棱飲片入血成分對香草酸、羥基苯甲酸、血清蘆丁及阿魏酸含量的药物药材影響。方法:采用高效液相色譜法，化学對3個不同產地的不地棱的含定三棱藥材4種有效成分及其在血清中的含量進行考察。結果:由於各地栽培的同产土壤、氣候等差異，入血不同產地三棱藥材4種成分體外和入血含量各不相同;藥材提取物中對羥基苯甲酸、成分蘆丁以安徽產地較高，量测香草酸以江蘇產地略高;入血成分中對羥基苯甲酸、基于蘆丁以安徽產地較高，血清阿魏酸、药物药材香草酸以江蘇產地略高，化学所有成分均在1 h左右達到峰值。不地棱的含定結論:入血成分含量測定對三棱藥材的同产產地鑒別具有一定的可行性，本研究可為三棱的資源綜合利用和質量控製提供實驗依據。
三棱指的是黑三棱科植物黑三棱的幹燥塊莖，其分布範圍主要包括長江中下遊流域，浙江、江蘇、安徽等地。三棱味辛、苦，歸脾經、肝經，性平，具有消積止痛以及破血行氣等功效，主要用於癥瘕痞塊，痛經，瘀血經閉，胸痹心痛，食積脹痛等。其主要成分為揮發油類、黃酮類、皂苷類、生物堿類、苯丙素類及有機酸類等。三棱具有擴血管、抗血栓形成、抗血小板聚集、鎮痛等作用。此外，三棱對人肺癌細胞及人乳腺癌細胞具有明確的細胞毒理作用，對肝癌細胞株具有明顯的抑製作用。
本研究旨在對浙江、江蘇、安徽三個產地三棱藥材中的化學成分以及血中移行成分含量進行比較分析，為三棱的資源綜合利用和質量控製提供實驗依據。
1實驗材料
1.1藥材
三棱藥材購自浙江中醫藥大學中藥飲片廠，浙江(批號:20171016)、江蘇(批號:20170925)、安徽(批號:20170812)，與2015版《中國藥典》一部的規定相符合。
1.2實驗動物
SD大鼠，SPF級，40隻，♂，體質量(280±20)g，浙江中醫藥大學實驗動物中心提供，動物許可證SCXK(滬)2013－0016。大鼠飼養環境:濕度40%～60%，溫度25～27℃，食物充足，照明適度，飲水自由。
1.3實驗試劑
對照品及內標物均由中國食品藥品檢定研究院提供，阿魏酸對照品(純度:≥98%、批號:110773－20161)、對羥基苯甲酸對照品(純度:≥99%、批號:MKBK3576V)、蘆丁對照品(純度:≥98%、批號:Y23M7N11586)、香草酸對照品(純度:98%、批號:110776－20150)、內標物核黃素(批號:JS0925ＲA14)。
1.4實驗儀器
Agilent1200型高效液相色譜儀器:美國Agilnent;Agilnent Eclipse XDB－C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm);QL－861渦旋混合儀:海門市其林貝爾儀器製造;XS205DU精密天平:METTLEＲTOLEDO公司;2－16PK離心機:德國Sigma公司;ND100－1氮氣吹掃儀:杭州瑞誠儀器有限公司;SK5210HP超聲波清洗儀:上海科導超聲儀器有限公司。
2實驗方法
2.1不同產地三棱藥材中化學成分分析
2.1.1溶液的配製
2.1.1.1對照品溶液的配製
精密稱取適量的對香草酸對照品、羥基苯甲酸對照品、蘆丁、阿魏酸對照品，溶解於比例為1:1的甲醇水溶液，混標儲備液的對照品濃度為1 g/L，配好備用。
2.1.1.2供試品溶液的配製
分別收集浙江、江蘇、安徽三個產地的三棱炮製品，取適量樣品粉末及適量甲醇加熱回流，放冷，甲醇補足失重，過膜即可。
2.1.2色譜條件
色譜柱:Agilent Eclipse XDB－C18(250 mm×4.6 mm，5μm);0.1%磷酸水溶液作為流動相A，甲醇為B，采用梯度程序進行洗脫:0～5 min，20%B，5～20 min，20～48%B，20～40 min，48～90%B，40～50 min，90%B，50～51 min，90～20%B，51～60 min，20%B。254 nm的檢測波長;1.00 mL/min的流速;柱溫保持30℃;進樣量均為10μL。
2.1.3方法學考察
2.1.3.1線性關係考察
將精密稱取的對照品溶液(0.125、0.25、0.5、1.25、2.5、6.25 mL)分別置於25 mL的容量瓶中，加50%甲醇至刻度，分別用移液器精密吸取10μL進行HPLC檢測。按流動相色譜條件分析，測定各自峰麵積，以橫坐標(X)代表質量濃度，縱坐標(Y)代表峰麵積，利用XY值繪製標準曲線。對羥基苯甲酸的回歸方程為Y=3.0722X－5.5952(Ｒ2=0.9997)，在質量濃度12.5～400 mg/L範圍內線性關係良好;香草酸的回歸方程為Y=2.6874X－5.9319(Ｒ2=0.9991)，在質量濃度7.5～250 mg/L範圍內線性關係良好;阿魏酸的回歸方程為Y=3.0578X－3.7665(Ｒ2=0.9995)，在質量濃度7.5～240 mg/L範圍內線性關係良好;蘆丁的回歸方程為Y=3.4586X－4.8854(Ｒ2=0.9998)，在質量濃度12.5～400 mg/L範圍內線性關係良好。
2.1.3.2精密度試驗
按照色譜條件，取10μL同一對照品溶液進樣檢測，連續進樣6次，以對羥基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、蘆丁峰麵積計算。結果ＲSD為0.24%、0.35%、1.05%、0.64%(n=6)，儀器精密度表現良好。
2.1.3.3穩定性試驗
取三棱樣品溶液10μL，按照HPLC色譜條件，分別於2、4、8、12、16、24 h進行上樣檢測並記錄峰麵積。對羥基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、蘆丁峰ＲSD分別為2.76%、2.48%、1.89%、1.68%(n=6)，結果顯示該樣品溶液在24 h的穩定性良好。
2.1.3.4重複性試驗
精密稱取6份三棱樣品，每份2 g，供試品溶液按照標準製備後進行HPLC檢測，記錄峰麵積。結果對羥基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、蘆丁峰的ＲSD分別為1.68%、1.54%、2.45%、2.14%(n=6)。
2.1.3.5加樣回收率試驗
采用加樣回收法，精密稱取已知含量的三棱樣品9份，加入對羥基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、蘆丁標準品，供試品溶液按照標準製備後進行HPLC檢測，計算回收率，對羥基苯甲酸的平均回收率為98.42%，ＲSD為1.79%(n=9);香草酸的平均回收率為97.35%，ＲSD為0.85%(n=9);阿魏酸平均回收率為99.12%，ＲSD為1.59%(n=9);蘆丁平均回收率為100.56%，ＲSD為1.89%(n=9)。
2.1.4不同產地三棱藥材含量測定
取3個產地的三棱樣品，按照標準製成供試品溶液。分別吸取供試品溶液10μL，進行HPLC檢測，根據相應線性關係計算樣品中對羥基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、蘆丁含量，結果見表1。
2.2不同產地三棱入血成分研究
2.2.1不同產地三棱藥材提取
采用傳統煎煮法，取3個產地三棱中藥製成含生藥2 g/mL的三棱水煎液原液。
2.2.2含藥血清製備
取SD大鼠40隻，♂，體質量(280±20)g，飼養1周。隨機分4組，每組10隻，空白對照組、浙江組、江蘇組、安徽組。每組分別給予相應的不同產地的三棱藥材提取液，空白對照組每天給予等量飲用水，每日固定時間灌胃。大鼠的常規給藥劑量按照(藥液濃度2 g生藥/mL，劑量2 mL/100 g)計算，灌胃1次/d，連續灌胃7 d。最後一次給藥前禁食12 h，末次給藥結束後，分別於0.5、1、1.5、2、4 h進行大鼠眼眶靜脈叢取血，3 000 r/m離心10 min，收集上層血清，56℃滅活30 min，取出後無菌過濾，放入－20℃冰箱保存。每組做混標，混合成2管血清組。
2.2.3對照品及內標的配製
精密稱取對香草酸對照品、羥基苯甲酸對照品、蘆丁及阿魏酸對照品適量，溶解於甲醇水溶液(1∶1)，混標儲備液的對照品濃度為1 g/L，充分混勻，超聲30 min，用0.22μm微孔濾膜進行過濾，保存在4℃，檢測前稀釋成不同濃度。精密稱取內標物核黃素適量，溶解於甲醇水溶液(1∶1)，配製內標物濃度為1 g/L的儲備液，渦旋充分混勻，超聲30 min，用0.22μm微孔濾膜進行過濾，保存在4℃。
2.2.4樣本處理
300μL甲醇和100μL內標溶液加到200μL血清樣本中，利用渦旋儀進行震蕩10 s，此時的溶液為乳白色懸濁液，12 000 r/min、4℃下離心12 min，蛋白質為底部白色沉澱。全部上清用移液槍吸出至離心管後進行氮吹，100μL甲醇水溶液(1∶1)複溶殘渣，渦旋混勻，常溫下12 000r/min離心10 min，取上清用於測定。
2.2.5色譜條件同2.1.2色譜條件。
聲明：本文所用圖片、文字來源《中國中醫藥科技》2020年7月第27卷第4期，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題，請與本網聯係
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