大黃又名川軍、不同將軍、产地黃良等，大黄的含定是中游一種多年生草本植物，2015版《中國藥典》規定大黃為蓼科多年生草本植物掌葉大黃(RheumpalmatumL)、离蒽量测唐古特大黃(RheumtanguticumMaxim.exBalf)或藥用大黃(RheumofficinaleBaill)的醌和幹燥根和根莖。掌葉大黃和唐古特大黃被稱為“北大黃”，结合主要產於青海和甘肅等地，蒽醌藥用大黃稱為“南大黃”，不同主要產於四川和陝西等地。产地大黃性寒味苦，大黄的含定歸脾、中游胃、离蒽量测大腸、醌和肝、结合心包經，具有清熱解毒、攻下、活血等功效。經現代藥理學研究表明其所含結合蒽醌具有致瀉作用，遊離蒽醌具有抑菌抗炎等功效；除此之外，還可用於消化係統和循環係統，可以調節機體的胃腸道功能，保護心血管作用，抗腫瘤和調節免疫功能。本文主要選取不同產地的大黃，根據《中國藥典》記載的測定方法，進行測定大黃中遊離蒽醌和結合蒽醌的含量，為大黃產地的優選和質量提供依據。

1實驗材料

1.1藥物

大黃素對照品：上海如吉生物科技，批號：180810；青海西寧大黃：西寧市康美中藥城；河北安國大黃：河北安國藥材市場；甘肅華亭大黃：華亭市馬峽鄉碾盤子村；甘肅平涼大黃：平涼市崆峒山後山；甘肅岷縣大黃：甘肅省定西市岷縣麻子川；甘肅宕昌大黃：宕昌縣；甘肅禮縣大黃：甘肅鑫晟源生物科技有限公司，批號：19081609；甘肅武威大黃：武威市古浪縣大靖鎮；安徽亳州大黃：亳州市佳旭藥業有限公司，批號：18041363。

1.2儀器

SP-1920型雙光束紫外分光光度計：上海光譜儀器有限公司；KDM型可調溫式電熱套：山東鄄城光明儀器有限公司；DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器：鞏義市予華儀器有限公司；RE-S2型旋轉蒸發器：上海亞榮生化儀器廠；FA2004B型電子分析天平：上海越平科學儀器有限公司；KQ-100DE型數控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；DG160C型一斤裝中藥材粉碎機：浙江省瑞安市飛達藥材器械廠；SP-756P紫外可見分光光度計：上海光譜儀器有限公司製造。

1.3試劑

甲醇(分析純)：天津市大茂化學試劑廠；醋酸鎂(分析純)：天津市大茂化學試劑廠；三氯甲烷(分析純)：天津市耀華化學試劑有限公司；水為蒸餾水。

2方法

2.1對照品溶液的配製

用大黃素作為對照品，0.5%醋酸鎂甲醇溶液作為顯色劑，精密稱定大黃素對照品20.00mg，置25mL容量瓶中，加0.5%醋酸鎂甲醇溶液至刻度線，然後搖勻，即得0.8g/L的大黃素對照品溶液[4]。

2.2供試品的製備

2.2.1結合蒽醌供試液的製備

依據《中國藥典》的方法，精密稱定大黃粉末(過四號篩)約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密量取甲醇50mL，加入到具塞錐形瓶，稱定其總重量，水浴加熱回流1h，放冷至室溫後，稱定其重量，再用甲醇補足冷凝回流時被揮發掉的甲醇，搖勻後用普通濾紙過濾。精密量取續濾液5mL，置燒瓶中然後揮幹甲醇，加8%HCL溶液10mL，超聲處理3min，再加三氯甲烷10mL，冷凝回流1h，放冷至室溫，置分液漏鬥中，用少量三氯甲烷洗滌容器，並入分液漏鬥中，振蕩搖勻，靜置5min，分離出三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取4次，每次6mL，合並三氯甲烷液，轉移至50mL容量瓶中，並定容至刻度線，搖勻，精密量取2mL溶液，置10mL容量瓶中，揮幹三氯甲烷，加0.5%醋酸鎂甲醇溶液至刻度線，搖勻，在紫外下測定其吸光度，根據標準曲線中的線性方程計算其含量。

2.2.2遊離蒽醌供試液的製備

依據《中國藥典》的方法，精密稱定大黃粉末(過4號篩)約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密量取甲醇50mL，加入到具塞錐形瓶，稱定其總重量，水浴加熱回流1h，放冷至室溫，再稱定其重量，再用甲醇補足冷凝回流時被揮發掉的甲醇，搖勻後用普通濾紙過濾，取續濾液2mL，置10mL容量瓶中，揮幹三氯甲烷，加0.5%醋酸鎂甲醇溶液至刻度線，搖勻，在紫外下測定其吸光度A，根據標準曲線中的線性方程計算其含量。

2.3波長的選擇

精密量取對照品溶液0.3mL,置25mL容量瓶中，加0.5%醋酸鎂甲醇溶液至刻度線，搖勻，以0.5%醋酸鎂甲醇溶液作為空白對照，依照紫外-可見分光光度法，在200～700nm波長範圍內掃描。結果表明蒽醌類成分在514nm處有最大吸收，所以測定波長選擇在514nm處。

2.4方法學考察

2.4.1線性關係考察

精密量取大黃素對照品溶液適量，加0.5%醋酸鎂甲醇溶液製成濃度分別為1.92、6.40、9.60、12.80、16.00、19.20、22.40mg/L的大黃素對照品溶液。以0.5%醋酸鎂甲醇溶液為空白對照，測定各溶液在514nm波長處的吸光度，並以濃度C(mg/L)為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪製標準曲線。計算得回歸方程為：Y=0.0418X-0.0733(R2=0.9964)。結果顯示配置的大黃素對照品溶液在濃度為1.92～22.4mg/L範圍內有良好的線性關係，其標準曲線見圖1。

2.4.2精密度試驗

取對照品溶液(12.68mg/L)，在514nm波長處，測定其吸光度，RSD=0.25%(n=6)。說明該儀器精密度較好。

2.4.3穩定性試驗

精密稱定禮縣大黃(過4號篩)兩份，每份約0.5g，按照“2.2”項下方法，製備供試品，以0.5%醋酸鎂甲醇溶液作為空白對照，分別在0、20、40、60、80、100、120min測定514nm處的吸光度。結果為遊離蒽醌的RSD為1.81%，結合蒽醌的RSD為1.86%。表明樣液在2h內基本穩定。

2.4.4重複性試驗

將“2.2.1”和“2.2.2”項下供試品溶液各製備6份，以0.5%醋酸鎂甲醇溶液為空白對照，在514nm波長處平行測其吸光度，計算大黃樣品的遊離蒽醌和結合蒽醌的平均含量分別為0.634%和7.28%，其RSD分別為2.90%和1.44%，則該方法重複性較好。

2.4.5結合蒽醌加樣回收率試驗

精密稱定，禮縣大黃粉末(結合蒽醌的含量為7.28%)3份，每份約0.3g。另精密稱定，大黃素對照品10.4、16、20mg，將此3份對照品分別加入3份樣品中，按照“2.2.1”項下方法製備供試品並測其吸光度。計算回收率。平均回收率99.44%(RSD=1.41%)。

3樣品測定結果

取各地區大黃藥材粉末(過4號篩)各12份，每份約0.5g。按照“2.2”項下供試品的製備方法，製備結合蒽醌供試液和遊離蒽醌供試液各6份，分別測定其吸光度，計算蒽醌的含量，結果見表1。從結果可以看出，遊離蒽醌產地最高的是甘肅宕昌大黃，其達到0.668%。結合蒽醌產地最高的是甘肅宕昌和甘肅禮縣大黃，均達到7.30%以上。

4討論

本文應用紫外-可見分光光度法對不同地區的大黃中遊離蒽醌和結合蒽醌進行含量測定。該測定方法相對來說比較成熟穩定，且簡單易行，成本低。各地區大黃蒽醌類成分的含量有所不同，主要與其生長的海拔、光照、年限等條件引起其蒽醌含量發生改變。通過對測定結果分析總結，發現甘肅宕昌縣和甘肅禮縣的大黃蒽醌類成分的含量比較高，其中遊離蒽醌類成分的含量高達0.668%，結合蒽醌類成分含量高達7.38%，與文獻研究結果相符；可以對甘肅宕昌縣和甘肅禮縣大黃進行進一步的開發和利用。

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