2.結果與討論

2.1儀器測定條件的液相幼儿選擇和優化

2.1.1檢測器的選擇

色氨酸由於其特殊結構，既具有紫外吸收，色谱食品又具有熒光響應。内标為使色氨酸的法测檢測能夠獲得較高的靈敏度, 需要確定色氨酸的最大吸收波長和最佳激發波長與發射波長。研究中首先通過二極管陣列檢測器（DAD）將色氨酸標準溶液在波長190~450 nm範圍內進行掃描,定婴結果表明,在檢測波長280 nm處，色氨酸有明顯的配方特征吸收峰，且基質幹擾較少，中色故將吸收波長280 nm作為紫外檢測器檢測色氨酸的氨酸檢測波長。同時將最大吸收波長280 nm作為激發波長通過熒光檢測器對色氨酸標準溶液進行發射光譜掃描，含量觀察到色氨酸在波長346 nm處具有較高的液相幼儿靈敏度。因此,色谱食品實驗最終確定熒光檢測器激發波長為280 nm，發射波長為346 nm。内标

經大量樣本檢測表明，法测在相同流動相條件下，定婴部分樣品的配方紫外色譜圖中在目標物的保留時間處有難以分離的幹擾峰，並影響到定量結果的準確性，故采用熒光檢測器進行檢測和定量。樣品紫外檢測器譜圖和熒光檢測器譜圖見圖1。

2.1.2流動相的選擇

流動相比較了0.1%的乙酸溶液-甲醇和10 mmol/L 醋酸銨溶液（pH=4.0）-甲醇體係的洗脫情況，結果表明在0.1%的乙酸溶液條件下個別樣品中有明顯的幹擾峰，且難以與目標物有效分離，導致定量結果不夠準確。而10 mmol/L 醋酸銨溶液（pH=4.0）條件下目標峰和內標峰均可以與幹擾峰（圖2，峰3）達到基線分離。譜圖見圖2。

a-甲醇-0.1%乙酸溶液b-甲醇-醋酸銨溶液

2.2試樣前處理條件的優化

2.2.1 堿的選擇

在樣品堿水解的過程中，考察不同的堿對水解結果的影響。方法研究中，選擇蛋白質含量最高的乳粉基質作為實驗對象，選取了相同濃度（4 mol/L）的LiOH、NaOH和KOH 3種堿溶液在相同試驗條件下進行試驗，考察堿水解後色氨酸含量的變化，結果見圖3。結果表明，在相同的條件下，使用LiOH溶液處理的樣品中色氨酸含量最高，使用外標法定量回收率83%，而NaOH溶液和KOH溶液對試樣中的色氨酸有不同程度的破壞，回收率隻有76%和70%，故方法選定LiOH溶液作為水解過程中的堿溶液。

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